【摘 要】
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[目 的]研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞的表达及对胶质瘤细胞迁移侵袭能力的影响。[方 法]16只6-8周龄健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组（n=8）及对照组（n=8）,利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核,建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21d处死小鼠,取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织,应用苏木精-伊红染色观察小鼠胶质瘤形态,用免疫荧光双标法检测Iba-1、P2X4受体的表达
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81260361）； 省基础研究计划（昆医联合专项）[No.2018FE001（-020）],小胶质细胞/巨噬细胞P2X4受体表达对胶质瘤细胞侵袭和迁移的作用机制研究,201808-202109；
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[目 的]研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞的表达及对胶质瘤细胞迁移侵袭能力的影响。[方 法]16只6-8周龄健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组（n=8）及对照组（n=8）,利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核,建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21d处死小鼠,取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织,应用苏木精-伊红染色观察小鼠胶质瘤形态,用免疫荧光双标法检测Iba-1、P2X4受体的表达情况;应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）,采用RT-qPCR技术检测P2X4受体及巨噬细胞极化相关标志物在TAMs的mRNA表达情况;Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况;利用siRNAP2X4下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达,并利用RT-qPCR和Western blot 技术检测 siRNA P2X4 转染后 TAMs 中 IL-1β、IL-18 mRNA 和蛋白的表达;同时,Transwell迁移及侵袭实验检测siRNAP2X4转染后TAMs对GL261细胞迁移侵袭能力的影响。[结 果]（1）HE染色结果显示:胶质瘤细胞向周围组织浸润,且肿瘤组织血管丰富,细胞排列紊乱,不规则或短梭形,核大深染,异型性明显;（2）与对照组相比,荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P＜0.0001）,且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.0013）;（3）使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后,M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达明显上调（P=0.0001及P=0.0011）,M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.0005及P=0.0064）,但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著,同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.0053及P=0.0147）;（4）干扰TAMs中P2X4受体表达引起其 IL-1β、IL-18 的 mRNA（P=0.0022、0.0035 及P=0.0018、0.0056）及蛋白表达水平（P=0.0077、0.0045及P=0.0325、0.0117）降低,并抑制TAMs促进胶质瘤细胞迁移和侵袭的能力（P=0.0167及P=0.0040）。[结 论]降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。
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