土壤中分离的棘阿米巴的18s rDNA分型鉴定及大蒜素对棘阿米巴的体外杀伤作用

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【目的】 分析延边地区土壤中分离的棘阿米巴(Acanthamoeba sp.)CJY/S1的18S rDNA基因型;并观察大蒜素对棘阿米巴的体外杀伤作用。【方法】 延边地区土壤中分离的Acanthamoeba sp.CJY/S1株PYG培养,常规氯仿-酚提取基因组DNA,应用棘阿米巴属特异性引物,PCR方法扩增并测18S rDNA序列。利用Genebank和分子生物学软件ClustalX进行序列分析,与基因库中已有T1至T12型序列进行比较并构建进化树。将致病性棘阿米巴用不同浓度的大蒜素处理,对照组加等量的PYG,30℃培养。分别于3h、24h在显微镜下观察细胞形态变化,作生长曲线观察增殖速率的变化,并透射电镜下观察其超微结构损伤情况。【结果】 从延边地区土壤中分离的棘阿米巴18S rDNA序列全基因长为2255bp,其基因型为T4型,与基因库中Acanthamoeba castellanii Neff ATC亲缘关系最近。大蒜素对致病性棘阿米巴原虫的体外杀伤实验表明,浓度为100ug/ml、1000ug/ml、10000ug/ml组的大蒜素处理3h均使棘阿米巴由滋养体转化为包囊,1000ug/ml、10000ug/ml组分别于处理24h、3h后观察到大量细胞分裂碎片;细胞生长曲线显示,与正常对照组比较,10ug/ml组增殖速率正常,而100ug/ml组4d内未见细胞增殖;超微结构改变表明,大蒜素作用浓度为100ug/ml时,对棘阿米巴的结构产生轻度破坏,当大蒜素作用浓度为1000ug/ml时,对棘阿米巴的结构产生严重破坏,导致棘阿米巴完全坏死。【结论】 Acanthamoeba sp.CJY/S1株为T4型,为Acanthamoeba castellanii;在体外大蒜素对棘阿米巴生长有明显抑制作用。
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