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背景:卵巢癌(ovarian cancer,OC)是一种高侵袭性的恶性肿瘤,致死率居妇科恶性肿瘤之首,是女性癌症相关死因的第五位。由于缺乏典型的早期症状体征和有效的早期筛查手段,约有70%的卵巢癌病例进展到疾病的Ⅲ期(51%)或Ⅳ期(29%)才能得到有效诊断。当卵巢癌局限在卵巢时,患者5年生存率为92%,而当卵巢癌出现扩散时,5年生存率下降为75%,当疾病进展到Ⅳ期发生远处转移时,5年生存率仅为29%。因此在卵巢癌的发展中,癌细胞迁移和肿瘤转移的状态,严重影响着卵巢癌病人的疾病预后。粘蛋白16(mucin-16,MUC16)表达于卵巢癌细胞表面,蛋白的胞外结构域可脱落,又称癌抗原125(cancer antigen 125,CA125)。CA125在83%确诊卵巢癌患者中升高,已被广泛用于卵巢癌的诊断和预后情况评估。近年来,研究发现CA125可以增强卵巢癌细胞的迁移侵袭能力,而DKK1蛋白则具有逆转CA125促进卵巢癌迁移能力的作用。本研究基于以上背景,研究了CA125在增强卵巢癌细胞的迁移能力的作用中,引起通路变化的机制。在小鼠成瘤实验中,研究了CA125促进卵巢癌转移的作用,并尝试寻找可以抑制CA125促进卵巢癌迁移和转移的生物治疗药物。目的:1.利用在线数据库,分析在卵巢癌组织中,DKK1表达水平相比正常组织变化情况。2.探索CA125降低卵巢癌细胞DKK1表达,与CA125促进卵巢癌细胞迁移能力两者之间的关系。3.筛选在CA125刺激后,卵巢癌细胞的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。并通过对DEGs进行通路分析,研究CA125刺激后细胞通路变化。4.验证通路分析结果,并探究在CA125刺激下,DKK1表达降低与细胞通路激活之间的关系。5.寻找生物制剂封闭CA125对卵巢癌细胞的作用,并在体外验证。6.在动物实验中检测CA125对卵巢癌肿瘤的转移促进作用,并应用生物制剂进行治疗。方法:1.使用Oncomine、CSIOVDB数据库,分析卵巢癌组织相比正常组织中DKK1表达量变化情况。2.使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q-PCR)方法和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测CA125刺激后卵巢癌细胞DKK1表达量变化。并使用Transwell小室检测DKK1表达量改变、CA125刺激与卵巢癌细胞迁移能力变化三者之间的关系。3.使用二代测序技术检测CA125刺激后DEGs,并对DEGs进行通路分析。4.通过Western Blot方法对通路分析结果进行了验证,并使用转染后降/过表达DKK1的细胞研究DKK1表达量变化、CA125刺激与上述细胞通路激活三者之间的关系。5.使用ELISA方法检测加入抗间皮素抗体(Anti-MSLN)时,CA125刺激细胞下DKK1表达量变化情况。使用Annexin-V-FITC/PI双重染色实验,检测加入CA125与Anti-MSLN后卵巢癌细胞凋亡比率的变化情况。6.使用小鼠成瘤模型,检测CA125对卵巢癌转移的作用,检测Anti-MSLN对卵巢癌肿瘤生成和转移的治疗作用。结果:1.在Oncomin数据库的子数据集Bonome、Yoshihara及CSIOVDB数据库中,卵巢癌组织中DKK1表达量相对于正常组织明显降低。且随患者FIGO分期、分级升高,卵巢癌组织中DKK1表达量下降。DKK1表达量降低的患者总生存率和疾病无进展生存率较低。2.加入CA125刺激后,卵巢癌细胞DKK1表达量降低。降表达DKK1可增强CA125对卵巢癌细胞的迁移增强作用,过表达DKK1则逆转这种作用。3.CA125刺激组与未刺激组相比,共分析得到41个DEGs(Fold Change>1,FDR≤0.001)。对DEGs通路分析得,SGK3/FOXO3通路明显变化。4.加入CA125刺激后,SGK3蛋白量变化不大,细胞核FOXO3蛋白含量下降。敲减DKK1表达,CA125刺激对SGK3/FOXO3通路激活作用增强,过表达DKK1,CA125刺激对SGK3/FOXO3通路激活作用逆转。5.加入Anti-MSLN后,CA125刺激未能引起DKK1表达量明显变化,且相对与CA125单独刺激时,卵巢癌细胞坏死凋亡比率增高。6.小鼠成瘤模型证实,CA125促进卵巢癌转移。注射Anti-MSLN治疗后,瘤体生成减小,肿瘤部位引流和转移减少。结论:1.卵巢癌组织中出现DKK1表达量减少的现象,表达量的降低趋势与疾病进展有关。体外实验中,CA125刺激卵巢癌细胞降低细胞内DKK1表达,与CA125增强细胞迁移能力有关。2.CA125刺激卵巢癌细胞引起SGK3/FOXO3通路激活。DKK1表达量变化与通路激活状态相关,DKK1降低可以引起通路进一步激活。3.Anti-MSLN可阻止CA125降低细胞DKK1表达的作用,且增强卵巢癌细胞在CA125刺激下的凋亡比率。4.CA125可以加快异体成瘤模型中卵巢癌肿瘤转移,Anti-MSLN可减少CA125刺激下的转移作用并减小肿瘤瘤体生成。靶向间皮素的抗体是未来可能应用于卵巢癌治疗的生物制剂。