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目的:1.利用UPLC-Q-Exactive HRMS技术对当归藤进行化学成分研究。2.建立当归藤UPLC指纹图谱。3.建立同时测定当归藤中原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素含量的UPLC方法,并对11批不同产地的当归藤药材进行含量测定。4.建立当归藤原花青素聚酰胺纯化工艺。5.对纯化后的当归藤原花青素进行体外抗氧化活性测定。方法:1、化学成分研究:利用UPLC-Q-Exactive HRMS技术对当归藤化学成分进行筛查,采用Thermo Gold C18色谱柱（2.1mm×100mm,1.9μm）进行分离,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.3ml/min,柱温35℃,采用正负离子同时采集模式,全扫描及自动触发二级质谱扫描模式,对当归藤进行化学成分分析。对所得到的化合物相对分子质量、多级离子碎片信息,与Chemspider数据库匹配,筛选出匹配度较高的化合物,并结合相关文献,对化合物进行质谱推导,推测可能的化合物。2、指纹图谱研究:利用UPLC对当归藤进行指纹图谱研究。采用Waters ACQUITY C18色谱柱（3.0 x 100mm,1.7μm）,以乙腈-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5ml/min,柱温为40℃,检测波长为230nm,进样量为3μl的色谱条件对不同产地的11批当归藤药材进行UPLC指纹图谱研究。利用UPLC-QTOF MS对指纹图谱中的色谱峰进行定性分析,并利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”进行共有峰的标定及相似度评价。采用SPSS 22.0统计软件对各不同产地11批当归藤药材进行系统聚类,采用Ward法对样品进行的聚类,以平方Euclidean距离为度量标准进行聚类分析。将11批当归藤指纹图谱共有峰面积导入SPSS22.0软件进行标准化处理,采用标准化标准化后的数据进行主成分分析并排名。3、含量测定研究:利用UPLC同时测定当归藤中原花青素B1、原花青素B2、儿茶素、表儿茶素四种成分的含量。色谱条件为:Waters ACQUITY C18（3.0 x 100mm,1.7μm）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,流速为0.5 ml/min;柱温为40℃,检测波长为230nm,进样量为2μl。对提取时间、甲醇浓度、料液比、药材粒径进行单因素考察,根据单因素结果对提取方法进行优化,并对11批不同产地的当归藤药材中的原花青素B1、原花青素B2、儿茶素、表儿茶素进行含量测定。4、纯化工艺研究:采用铁盐催化法对当归藤原花青素类成分进行含量。采用聚酰胺树脂层析法,对当归藤原花青素进行纯化工艺研究,考察了聚酰胺静态吸附曲线、静态解吸曲线、上样液浓度、上样液流速、解吸液体积分数、解吸流速等方面进行考察,并绘制聚酰胺泄漏曲线、解吸曲线,计算不同乙醇梯度洗脱部位的洗脱率及原花青素纯度。5.体外抗氧化研究:采用DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的清除能力以及当归藤原花青素总还原能力实验对经聚酰胺纯化后的原花青素进行体外抗氧化活性研究,以原花青素对照品及维生素C为阳性对照,对当归藤原花青素抗氧化能力进行评价。结果:1、根据所得到的离子碎片进行谱库匹配,共筛选出10个匹配度较高的化合物,分别是:甘露醇、蔗糖、柠檬酸、烟酰胺、没食子酸、原儿茶酸、原花青素B1、儿茶素、木兰花碱、3,4-二羟基苯甲酸乙酯,再结合相关参考文献对这10个化合物进行质谱裂解推导,发现与谱库匹配结果基本一致。2、建立了当归藤UPLC指纹图谱共有模式,利用UPLC-QTOF MS指认了4个共有峰,分别是原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素,选取色谱图中响应值最高、峰形最好的原花青素B1为参照峰。相似度结果显示11批次当归藤药材的相似度均大于0.9,说明不同产地的当归藤化中化学成分有很高的一致性,该药材的化学成分较为稳定。聚类分析中,当d＜10时,样品聚为2类,当d＜5时,样品聚为4类。主成分分析提取了2个成分作为主成分,累计贡献率达到89.798%,根据主成分综合得分模型,对11批当归藤进行综合评价,并得到了不同产地当归藤综合质量排名。3、建立了当归藤中原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素四种成分同时测定的UPLC方法。对照品线性关系考察结果显示:原花青素B1在1.2512～31.28μg/ml（r=0.99999）、儿茶素在0.4672～11.68μg/ml（r=0.99999）、原花青素B2在1.3056～32.64μg/ml（r=0.99999）、表儿茶素2.88～48.00μg/ml（r=0.99999）范围内线性关系良好。单因素试验结果显示,当料液比为1:40g/ml,甲醇浓度为50%、粒径为3号筛、提取时间为20min时,上述四种成分含量较高。11批不同产地当归藤中:原花青素B1的含量范围为0.0344～0.1849mg/g;儿茶素的含量范围为0.0364～0.1451mg/g;原花青素B2的含量范围为0.0270～0.1255mg/g;表儿茶素的含量范围为0.0356～0.1887mg/g。4、通过单因素试验确定了当归藤聚酰胺树脂的最佳纯化工艺:最佳上样浓度为1.88mg/ml～3.21mg/ml、最佳上样流速为2～3ml/min、聚酰胺动态比吸附量为16.05mg/g,最佳洗脱流速为2～3ml/min,30%乙醇梯度洗脱率为7.02%,原花青素纯度为31.02%;50%乙醇梯度洗脱率为58.87%、原花青素纯度为75.93%;70%乙醇梯度洗脱率为8.72%,原花青素纯度为89.94%;95%乙醇梯度洗脱率为1.05%,原花青素纯度为96.76%.5、抗氧化实验发现,当归藤原花青素及原花青素对照品对ABTS自由基的清除率及总还原力与维生素C相比比较接近,但是对DPPH自由基的清除率及超氧阴离子的清除率不及维生素C。实验结果显示,当归藤原花青素及原花青素对照品发挥抗氧化能力可能以ET反应途径为主。结论:1.UPLC-Q-Exactive HRMS技术可快速地对当归藤多种化学成分进行定性识别。2.所建立的当归藤UPLC指纹图谱分离度好,分析时间短,精密度高、稳定性较好,达到了对当归藤指纹图谱研究方法提升优化的目的。3、所建立的UPLC含量测定方法精密度高,稳定性好,可作为当归藤中原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素的含量测定方法。4.优选出来的当归藤原花青素聚酰胺纯化工艺能够满足对当归藤原花青素纯化的要求,为后续开展当归藤原花青素的药理活性研究奠定了一定的物质基础。5.抗氧化实验表明当归藤原花青素具有良好的抗氧化活性。