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随着转基因技术的快速发展,越来越多的转基因作物进入商品化阶段,转基因作物和其加工制品已进入人们的日常生活,随之对人类以及生态环境的影响备受公众关注。本文以转Bt抗虫水稻"华恢1号"为原料,采用不同加工方法,研究其内外源DNA在加工过程中的降解变化,以利相关检测方法的建立,为今后我国转基因水稻加工制品的检测监管提供科学依据和技术支持。PCR方法定性研究不同加工方法对转Bt抗虫水稻的内外源DNA的降解作用。以转Bt抗虫水稻"华恢1号"及其阴性对照"明恢63"为原料,选择煮制、高压煮制处理、米果加工和米酒发酵等加工方法,并针对内源基因(SPS基因)、外源基因或元件(包括actinl启动子、CryIAb/Ac基因、外源基因3’端接合序列、NOS终止子)设计不同扩增片段大小的引物,PCR扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:不同形式的加工方法对水稻的内外源DNA产生了不同程度的降解作用。高压煮制处理对转基因水稻内外源DNA的降解作用大于煮制;在米果加工中,经过煮制、一次干燥和二次干燥加工后,油炸处理对转基因水稻内外源DNA的降解作用最大,随后依次是焙烤和微波处理;在米酒加工中,经过煮制对转基因水稻内外源DNA降解后,米酒发酵过程并没有使转基因水稻内外源DNA产生进一步的降解;实验中长度小于200 bp的扩增片段在所有加工过程中均可以被检测出,具有较高的稳定性。荧光定量PCR方法定量研究不同加工方法对转Bt抗虫水稻的内外源DNA的降解作用。在定性研究的基础上,进行荧光定量PCR检测与分析。结果表明,试验中长度小于200 bp的扩增片段在加工过程也会发生不同程度的降解。不同加工处理对转基因水稻内外源DNA产生了不同程度的降解作用,对于SPS基因、actin1启动子、Cry1Ab/Ac基因、外源基因3’端接合序列、NOS终止子,油炸处理的降解率分别为99.9%、99.9%、99.8%、99.8%、99.9%;焙烤处理内外源DNA的降解率分别为98.4%、98.7%、98%、97.9%、98.2%;微波处理内外源DNA降解率分别为86.1%、89.5%、88.7%、84.1%、89.3%;酒酿处理内外源DNA的降解率分别为75.6%、79.5%、77.2%、74.5%、77.1%。可以看出对转基因水稻内外源DNA的降解作用由大到小,依次为油炸、焙烤、微波、酒酿发酵。高压煮制处理对于相应的内外源DNA的降解率分别为74.9%、80.4%、77.5%、73.8%、77.5%。普通蒸煮对于相应的内外源DNA的降解率分别为74.4%、77.6%、76.1%、73.4%、76.9%。高压煮制处理与普通蒸煮相比,对转基因水稻内外源DNA的降解作用稍大。这与定性降解分析得出的结论基本一致;此外,同一加工过程对于不同基因的降解作用不同,在检测加工品中转基因成分含量时,转基因含量取决于外源基因对内源基因的相对稳定性,以不同的外源基因代表转基因成分会得到不同的转基因含量检测结果。