禾谷镰孢组蛋白变体H2A.Z的功能研究

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组蛋白变体H2A.Z在真核生物的多种生命活动中发挥重要的调控作用。目前,禾谷镰孢H2A.Z的功能及其调控机制尚未见研究报道。本研究通过生物信息学方法,确定了禾谷镰孢H2A.Z的编码基因为FgHtz1;利用基因敲除技术,获得了FgHtz1基因的敲除突变体;通过对突变体的表型和致病力进行分析,明确了禾谷镰孢H2A.Z在病菌生长、发育和致病过程中的功能。研究结果为阐明H2A.Z调控禾谷镰孢生长、发育和致病力的分子机制奠定了基础。主要结果如下:1.试验构建了禾谷镰孢FgHtz1基因的同源重组载体,利用PEG介导的原生质体转化技术转化禾谷镰孢野生型菌株PH-1,获得了草铵膦抗性的转化子;利用PCR和qRT-PCR技术对转化子进行鉴定,确定了所获得的阳性转化子为FgHtz1基因的敲除突变体,分别命名为AFgHtz1-1、AFgHtz1-2与AFgHtz1-3。2.对FgHtz1基因的敲除突变体的表型和致病力进行分析,发现突变体的生长速度减慢,色素产生较少,分生孢子变小且产量降低,对玉米的致病力减弱,表明禾谷镰孢H2A.Z参与病菌的生长、发育和致病力的调控过程。3.检测FgHtz1基因的敲除突变体对非生物胁迫的敏感性,发现在刚果红的培养基上,突变体受抑制的程度显著低于野生型;在山梨醇、H2O2培养基上,突变体受抑制的程度显著高于野生型,表明禾谷镰孢H2A.Z参与病菌细胞膜的完整性以及对渗透胁迫和氧化胁迫的响应。
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