豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后iNOS活性与细胞凋亡关系

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[目的]:通过建立豚鼠耳蜗缺血再灌注动物模型:1. 观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的形态学改变2. 对缺血及不同时间段内再灌注的耳蜗组织iNOS 分布进行图像分析3. 观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的细胞凋亡情况4. 对缺血及不同时间段内再灌注的耳蜗组织iNOS 分布与细胞调亡间关系进行分析5. 探讨地塞米松对以上改变的作用[方法]:健康豚鼠72 只,雌雄不拘。随机分成正常组、假手术组、地塞米松干预后假手术组、模型组和干预组(地塞米松术前腹腔注射)。后二组各在缺血30 分钟、再灌注6 小时及再灌注24 小时取材。每组各8 只。耳蜗缺血再灌注模型的建立方法:首先运用微动脉夹夹闭一侧颈总动脉并烧灼双侧椎动脉建立耳蜗缺血模型,打开微动脉夹建立再灌注模型。假手术组仅打开暴露血管。用组织化学方法观察缺血再灌注不同时间点耳蜗各部位的组织学改变,并与运用地塞米松干预后的结果进行比较;用免疫组织化学法(ABC)法检测各组动物耳蜗中iNOS 的表达和变化;用原位凋亡法(TUNEL 法)观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注的细胞凋亡情况,并与地塞米松干预后进行比较。本实验的数据应用SPSS 统计软件包进行统计学处理,多个样本均数差异的显著性检验应用方差分析,以P<0.05 作为有显著性差异意义。[结果]:HE 染色见正常组及假手术组Corti 器毛细胞无损伤,血管纹清晰;缺血及再灌注各组均可见内外毛细胞变形,Corti 器内外毛细胞缺损,血管纹变薄。地塞米松干涉组较相对应的再灌注诸组细胞变形、缺损均减轻。缺血及再灌注各组在血管纹、螺旋神经节和Corti 器iNOS 阳性表达较正常组与假手术组明显增强。而地塞米松干预组耳蜗各转组织iNOS 阳性表达较再灌注各组有减弱的趋势。正常组及假手术组没有或仅有个别部位出现细胞凋亡,缺血及再灌注各组内外毛细胞及螺旋神经节部位凋亡细胞明显增多,和正常组及假处理组间有显著差异(P<0.01)。地塞米松干预后
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