【摘 要】
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新型冠状病毒SARS-Co V-2是最新发现的一种属于冠状病毒β属的RNA病毒。自2019年起,SARS-Co V-2在全球范围内的大流行已造成近2.79亿人感染,其中超过五百万人死亡。在以往针对此类大流行疾病的预防手段中,疫苗被认为是最有效的手段。目前已有多种疫苗处于临床实验阶段或已经上市,这些疫苗可以概括为:减毒活疫苗、灭活疫苗、病毒载体疫苗、亚单位疫苗以及核酸类疫苗五种,其中核酸类疫苗又分为
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新型冠状病毒SARS-Co V-2是最新发现的一种属于冠状病毒β属的RNA病毒。自2019年起,SARS-Co V-2在全球范围内的大流行已造成近2.79亿人感染,其中超过五百万人死亡。在以往针对此类大流行疾病的预防手段中,疫苗被认为是最有效的手段。目前已有多种疫苗处于临床实验阶段或已经上市,这些疫苗可以概括为:减毒活疫苗、灭活疫苗、病毒载体疫苗、亚单位疫苗以及核酸类疫苗五种,其中核酸类疫苗又分为DNA疫苗和RNA疫苗。在这些COVID-19疫苗中,核酸类疫苗的异军突起和广泛使用,提示了免疫原性分析和有效递送系统的筛选对疫苗设计的重要性。本研究基于SARS-Co V-2核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein;N）所表现出来的高度保守性和强免疫原性构建重组质粒,利用脂质体包被重组质粒开展针对SARS-Co V-2的DNA疫苗研发。在本项研究中,我们利用阳离子脂质、DOPE、胆固醇、PEG2000-DMG组合包被SARS-COV-2核衣壳蛋白表达质粒形成LNP-DNA脂质纳米颗粒,经超离纯化、核酸电泳、透射电镜、扫描电镜鉴定后转染293T细胞。通过Western-blot检测和免疫荧光进行表达效率分析,并通过肌肉注射方式免疫Balb/c小鼠对其进行初步的免疫学评价。结果表明,通过阳离子脂质、DOPE、胆固醇、PEG2000-DMG组合可有效包被形成50～100 nm的LNP-DNA脂质体纳米颗粒,并且在人源细胞293T表达系统中具有较高的转染效率和表达水平。利用LNP-DNA脂质体纳米颗粒免疫两次后的小鼠,接种部位肌肉中能成功检测N蛋白的表达,ELISA和ELISpot结果显示LNP-DNA脂质体颗粒能够诱导相应的特异性抗体和T细胞免疫应答。综上所述,通过制备的能够形成稳定的纳米颗粒的候选重组脂质体DNA疫苗可能具备进一步开发的的潜质,有望为解决目前疫情严峻的局面提供一定的帮助。
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