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研究背景:酪氨酸激酶抑制剂是靶向治疗慢性粒细胞白血病（慢粒）药物，但存在耐药、患者无法耐受等问题。Stat5是P210酪氨酸激酶介导慢粒发生的关键通路，与酪氨酸激酶抑制剂耐药密切相关，是潜在的慢粒治疗靶点。熊果酸是有效的抗肿瘤化合物，在体外可诱导K562细胞凋亡，但分子机制不清。 研究目的:在研究熊果酸对K562细胞Bcl-xL凋亡相关蛋白作用基础上，探讨熊果酸(Ursolic Acid,UA)对Stat5通路抑制效应与机制及其在慢粒治疗中的应用价值。 实验方法: 1.不同浓度UA处理K562细胞24小时或30μM UA处理K562细胞不同时间，Western blotting检测PARP、Casepase3、Casepase9、Casepase8、Bcl-xL、Mcl-1、XIAP、Bim、p-Bad（Ser112）、p-Bad（Ser136）、Bad、p-Stat5（Tyr694）、Stat5、Gfi-1、p-Akt（Ser473）、p-Akt（Thr308）、Akt1、Akt2和Akt蛋白表达改变；RT-PCR检测Bcl-xL、Mcl-1、XIAP、Bim、Stat5a、Stat5b、Gfi-1、Akt1和Akt2等mRNA水平表达的改变； 2. siRNA观察Gfi-1在UA抑制Stat5表达和诱导细胞凋亡中的作用；观察Stat5在UA抑制Akt1/2表达中的作用； 3.不同浓度UA或伊马替尼(Imatinib, Ima)作用Ima耐药株K562G0172小时，UA单独或与Ima联合作用K562与K562G01细胞48小时，MTT检测细胞增殖。FACS检测细胞凋亡； 4.不同浓度UA处理K562G01细胞24小时, Western blotting检测PARP、Casepase3、Casepase9、Bcl-xL、Mcl-1、p-Bad（Ser136）、Bad、p-Stat5（Tyr694）、Stat5、Gfi-1、Stat5、Akt1、Akt2和Akt蛋白表达改变；UA单独或与Ima联合作用K56248小时, Western blotting检测PARP、Casepase3、p-Bcr/Abl（Tyr245）、Bcr/Abl、p-Stat5（Tyr694）、Stat5、Bcl-xL、Mcl-1等蛋白表达改变； 5. Chou-Talalay分析UA与Ima联合抗K562和K562G01增殖效应。 结果: 1. UA对Bcl-xL、Mcl-1转录和蛋白表达抑制和Bad去磷酸化作用呈时间与剂量依赖性； 2. UA对Stat5活性和Stat5总蛋白表达与Stat5a/b转录抑制作用呈时间与剂量依赖性； 3. UA对Gfi-1转录和蛋白诱导表达呈时间依赖性，si-Gfi-1可阻断UA对Stat5b、Bcl-xL、Mcl-1转录抑制，并部分阻断UA诱导的细胞凋亡； 4. UA对Akt活性抑制作用呈剂量依赖性；UA对Akt、Akt1/2蛋白表达和Akt1/2转录抑制作用呈时间与剂量依赖性； 5. Stat5抑制剂SH-4-54可减少Akt、Akt1/2蛋白表达和Akt1/2转录； 6. si-Stat5可降低Akt1/2、Bcl-xL、Mcl-1转录；减少Akt、Akt1/2、Bcl-xL、Mcl-1表达并使Bad去磷酸化； 7. UA可抑制K562G01增殖并诱导其凋亡，升高Gfi-1蛋白表达，降低Bcl-xL、Mcl-1、Stat5、Akt1/2、Akt蛋白表达和使Bad去磷酸化； 8. UA与Ima联合对K562与K562G01增殖抑制和凋亡诱导有协同效应；UA与Ima联合可抑制K562细胞Bcr/Abl、Stat5、Bcl-xL、Mcl-1蛋白表达，降低Bcr/Abl和Stat5活性。 结论: 1. UA诱导K562细胞凋亡涉及Stat5通路抑制； 2. UA可克服酪氨酸激酶抑制剂耐受性； 3. UA与酪氨酸激酶抑制剂有协同抗白血病效应。