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exosomes是由细胞内的多泡体(multivesicularbody,MVB)与细胞膜融合后,释放到细胞外环境中的一种膜性囊泡。exosomes重要的特性是可表达来源细胞的各种功能蛋白,肿瘤细胞来源的exosomes(tumor derived exosomes,TEX),含有肿瘤相关抗原如MAGE、NY-ESO-1分子,及抗原提呈过程中的分子伴侣-热休克蛋白(heat shock protein, HSP)等。因此,exosomes可作为新的肿瘤抗原,诱发和增强机体的免疫反应,成为一种新型的具有免疫原性的非细胞性肿瘤疫苗。目的用5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-de-oxycytidine,5-Aza-CdR)诱导肝癌细胞分泌exoxomes,探讨其生物学特性、免疫学功能及其负载的免疫相关分子的抗肿瘤活性,以期成为理想的抗肝癌的肿瘤疫苗,为研制具有临床应用前景的高效非细胞性肿瘤疫苗提供新思路。方法选取两种肝癌细胞株：HepG2细胞和Hep3B细胞,分别收集5-Aza-CdR诱导前后的两种细胞培养上清液,分别进行离心超滤联合蔗糖密度梯度离心,提取出exosomes。用透射电镜观察其超微结构,用Western Blot法,检测exosomes上HSP70,HLA-Ⅰ和NY-ESO-1分子的表达。用BCA蛋白测定法测定exosomes的蛋白浓度,计算exosomes的总蛋白含量。通过RT-PCR检测两种细胞野生型p53的表达。结果经5-Aza-CdR诱导后,肝癌细胞HepG2细胞和Hep3B细胞分泌exosomes的数量均增加(P<0.05),其负载的HSP70,HLA-Ⅰ和NY-ESO-1分子表达明显增高(P<0.05),exosomes.总蛋白含量明显增高(P<0.05),野生型p53基因mRNA表达增高(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可诱导HepG2细胞和Hep3B细胞分泌的exosomes数量增多,其机制可能与活化p53基因后,促进exo-somes的生成有关。5-Aza-CdR可上调HSP70分子的表达,而HLA-Ⅰ、NY-ESO-1分子的上调则是通过DNA去甲基化途径实现的。本研究为肝癌细胞来源的exosomes最终研制成为肿瘤疫苗奠定了实验基础。