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口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科(Picornaviridae)口疮病毒属(Aphthovirus)的成员，引起的口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一种急性、烈性、高度传染性的病毒病，主要感染牛、羊、猪、鹿等偶蹄类动物。本病除了直接引起幼畜死亡、减少动物体重和产奶量，还导致全球范围内动物及动物产品的国际贸易限制，造成严重的经济损失，是对偶蹄动物威胁最大的传染病。目前广泛使用的全病毒灭活疫苗在应用过程中发现诸多不足，开发新型疫苗来弥补这些不足显得极为迫切。FMDV结构蛋白VP1上存在重要的B细胞和T细胞表位参与构成主要抗原位点。故本研究构建了基于VP1的融合蛋白病毒样颗粒（VLPs），来研究该融合VLPs的组装情况及免疫效果。本研究根据FMDV Asia1/JS/CHA/05序列和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）流行株BVDV JZ05-1序列，选择BVDV核心蛋白P14，第169~270位氨基酸和FMDV结构蛋白VP1的第1~211位氨基酸，两者之间设计柔性肽SGSPSGPGSG连接，通过融合PCR获取P14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列。全基因长988bp，克隆到链接有分泌信号肽的pBLR18载体上构建成pBLR18-P14-VP1质粒。从该质粒上获得分泌信号肽-P14-VP1基因，与枯草芽孢杆菌表达载体p7257-P43连接，构建成表达质粒p7257-P43-P14-VP1。转化枯草芽孢杆菌WB800，经筛选、鉴定，获得表达P14-VP1融合蛋白的枯草芽孢杆菌。该芽孢杆菌在含有40μg/mL氯霉素的LB中培养后，菌液上清中可检测到目的蛋白。Western blot结果显示，该蛋白能够特异性识别Asia1型FMDV抗体。透射电镜观察显示，融合蛋白组装为直径约50nm大小的病毒样颗粒（VLPs）。将WB800表达的P14-VP1融合蛋白组装成的VLPs，与MONTANIDE ISA206VG佐剂联合免疫小鼠，设灭活FMDV和PBS对照组。分别于免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周尾根静脉采血分离小鼠血清，用间接ELISA和病毒中和试验检测体液免疫效果。与对照组相比，接种融合蛋白的小鼠能够产生ELISA抗体，但其血清无中和病毒的能力。