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目的：阐明推拿手法对不同年龄段家兔骨骼肌急性钝挫损伤、成年家兔骨骼肌重复损伤后骨骼肌再生修复的规律以及推拿手法治疗的机理。
方法：
1、分别取27只6月龄、6只16月龄雄性新西兰家兔,通过腓肠肌打击造模,确定家兔骨骼肌钝挫伤模型的适宜造模参数。
2、制作检测骨骼肌收缩力量和收缩产生的位移的传感器,研究骨骼肌损伤后功能变化。通过制作按揉手法负荷传感器,并与手法测试仪组成手法测试系统,以保证实验过程中手法操作的规范性、同一性。
3、通过正交实验设计,对54只6月龄雄性新西兰家兔用不同手法参数组合治疗,以收缩力、收缩位移、肌酸激酶作为评价指标,选择出推拿手法治疗家兔骨骼肌损伤的最佳“力-频率-时间”的参数组合。
4、取6月龄雄性新西兰家兔90只,计算机随机分为三大组：损伤观察组42只、手法治疗组42只和正常对照组6只。除正常对照组外均造模。损伤观察组、手法治疗组又再随机分为7小组,每小组6只家兔,分别在造模后第2、3、5、8、12、16、21d取材检测,目的是按照日期作一连续动态观察。从组织形态、卫星细胞计数、肌酸激酶、收缩力和收缩位移、电生理等的变化,来观察推拿手法对成年家兔骨骼肌急性钝挫伤后肌卫星细胞增殖以及骨骼肌功能的影响,探讨骨骼肌再生修复的机理以及手法干预的机理。
5、将16月龄雄性新西兰家兔78只随机分为三大组：损伤观察组、手法治疗组和正常组。而观察组和治疗组又进一步随机分为6小组,每小组6只兔子,分别在造模后第2、5、8、12、16、21d取材检测,同样作一连续观察。观测项目除与成年组相同外加测HGF、MyoD及IGF-I等指标。最后将老年组数据与成年组相对应治疗时间的数据比较分析,以探讨老年家兔骨骼肌损伤后再生修复规律及手法治疗的机理。将6月龄雄性新西兰家兔132只随机分为损伤痊愈观察组,未治疗再损伤观察组、再损伤治疗组及再损伤观察组,各组又按每小组6只兔子进一步分组,在造模后第32、36、40、45、50d取材检测,并将该组数据与第四部分数据合并分析。除痊愈过程观察组外其它三组均须在首次造模后第30d进行第二次造模。观测指标同老年组。探讨骨骼肌重复损伤后再生修复能力及其机理,以及手法治疗机理。
结果：
1、对于6月龄兔子,骨骼肌钝挫伤模型的适宜造模参数是：打击重量2kg,重物下落距离50cm;对于16月龄兔子及6月龄兔子再次损伤时,骨骼肌钝挫伤模型的适宜造模参数是：打击重量1.75 kg,重物下落距离50cm成年家兔骨骼肌重复损伤模型第一次造模同成年组参数,二次造模同老年组造模参数。
2、所制作收缩力、位移传感器可以精确反映出骨骼肌收缩的情况。手法动态测试仪可以用来对手法力和频率进行有效控制,保持手法的同一性。
3、通过正交实验结果分析,认为对于家兔骨骼肌急性钝挫伤而言,“2kgf(力)-140次/分钟(频率)-15分钟(时间)”参数组合可以产生最大收缩力和收缩位移,使肌酸激酶(CK)值降至最低。
4、成年家兔损伤治疗结果：从光镜HE染色切片及电镜照片结果,手法治疗组修复情况比观察组好,产生的胶原纤维数量都比观察组少；治疗组CK降低的整体效应比观察组好；手法治疗组能明显改善骨骼肌收缩功能,增加收缩力,增大收缩位移。卫星细胞半定量计数显示：治疗组与观察组卫星细胞数量随天数均有明显上升,手法治疗组最明显,二组都在16天左右时卫星细胞数量达到顶点。
5、从形态上,老年组的情况类似于成年组,与观察组相比,手法可以减轻纤维组织的增生的程度,这一点成年组的表现比较明显。老年正常组的卫星细胞数量少于成年正常组,但统计学上无差异。老年观察组和老年手法组的卫星细胞数量均大于老年正常组。成年观察组和成年手法组的卫星细胞增殖情况明显多于老年组。老年兔子正常组骨骼肌收缩力已经较成年兔子的收缩力减弱。手法组的收缩力比观察组的收缩力恢复要好。老年正常组兔子的骨骼肌收缩位移比成年正常组兔子小,手法组的收缩位移比观察组的收缩位移要大。老年兔子的骨骼肌中MyoD和HGF表达量在损伤后减少,而IGF-I表达增加。手法可以促进MyoD、HGF、IGFI-I的表达。
6、再损伤组骨骼肌再生修复与成年首次损伤后相似,但总体卫星细胞增殖能力降低,收缩力、收缩位移等恢复能力较差。MyoD、HGF及IGF-I变化规律与老年组相似。
结论：家兔骨骼肌钝挫伤模型接近临床实际情况。收缩力、收缩位移传感器可以作为评价骨骼肌功能的有效工具,手法测试仪可以保证实验中推拿手法的标准化,可以对推拿科研产生有效促进作用。按揉法的2kgf(力)-140次/分钟(频率)-15分钟(时间)参数组合是治疗家兔骨骼肌急性钝挫伤的最佳手法参数组合。
推拿手法可以促进卫星细胞(SC)激活、增殖,促进细胞再生修复。推拿手法可以改善胶原纤维增生的程度,但并不能完全抑制纤维修复。即在骨骼肌修复过程中不能完全以再生修复替代疤痕修复。推拿手法可以加速骨骼肌功能的改善。随着年龄增加及反复损伤,骨骼肌的再生能力降低。