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卡拉胶是从多种海洋红藻中提取的一种水溶性硫酸酯多糖,工业应用广泛,是世界三大海藻胶工业产品(琼胶、卡拉胶、褐藻胶)之一。本文采用D-半乳糖-6-硫酸化酶对琼枝麒麟菜卡拉胶改性制备高凝胶强度卡拉胶,同时对传统碱改性方法进行优化,并对两种方法改性后的卡拉胶性质进行比较;最后探讨了不同因素对卡拉胶凝胶强度的影响。实验结果如下:首先,对硫酸化酶改性制备高凝胶强度卡拉胶进行了研究。先从琼枝麒麟菜中分离纯化D-半乳糖-6-硫酸化酶。最佳提取条件为:采用液氮冷冻研磨法破碎藻体,最佳提取溶液为含0.5M KCl的Tris-HCl(pH9.5,50mM)缓冲溶液,最佳料液比1:3。此条件下提取所得酶活力为9.3U。经过70%乙醇沉淀、 DEAE Sepharose FF色谱分离和HiTrap Phenyl Sepharose FF (high sub)色谱分离纯化得酶的分子量为65kDa,比酶活酶18的6.4最5适μM宜m pgH-1m为in7-1.,0,纯最化适倍宜数温达度4为.934倍0℃,,酶金活2属回5%离收~子率30%C为a18.38%。酶活性试验可知,2+、Mg2+、Co2+、Na+和K+对于活并没有显著影响,Ba2+和Cu2+离子抑制酶活力,Mn2+抑制了60%的酶活力。用0-20U的硫酸化酶对卡拉胶进行改性研究,酶添加量为20U时,卡拉胶凝胶强度达到1249.23g/cm2,提高了8.2倍。其次,对碱法改性工艺进行了优化。结果表明,氢氧化钾改性卡拉胶的凝胶强度优于氢氧化钠和碳酸钠法。经单因素实验和正交实验优化后,最佳碱处理条件为:氢度氧达化钾10浓25度.871g2/%cm,2,提提取高温了度68.57℃倍,。提对取比时结间果为可3知.5,h。酶在法此改条性件提下升提凝取胶的强卡度拉的胶效凝果胶优强于碱法改性。再次,对酶改性卡拉胶和碱改性卡拉胶进行性质测定。酶法卡拉胶和原始卡拉胶分的别分为子量26差.19异%不和明1显8.6,8%而,碱粘法度卡分拉别胶为的4分0.子00量m显Pa著s降和低21;.6两7m种P卡a拉胶的硫酸基去除率优和于53碱.4法℃,卡相拉比胶未。处红理外卡光拉谱胶结的果融显点示(改5性1.后3℃μ)-卡有拉所胶升转高化,为结了果κ可s,-卡知融拉酶点胶改分。性别卡为拉5胶3.性6℃能最后,对影响琼枝麒麟菜卡拉胶凝胶强度的几个因素进行了探讨。凝胶测定放置时间宜控制在8-10h之间;卡拉胶凝胶浓度1.5%及以上时强度稳定;温度与卡拉胶的凝胶强度呈负相关; pH在6-8之间凝胶强度较稳定,搅拌作用对形成的凝胶强度无显著影响;凝胶强度在添加0.9%KCl时达到最高值。