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生物体的生命活动中,维护基因组的稳定性是极其重要的,基因组的稳定性受到破坏会引发癌症。范可尼途径(FA)在S期修复DNA的链间交联损伤(ICLs)过程中发挥了十分重要的作用。范可尼通路的核心事件是FA核心复合物介导的FANCI-FANCD2单泛素化,其可以偶联下游的同源重组修复(HR)、碱基切除修复(NER)和跨损伤修复(TLS)共同修复DNA的链间交联损伤的。 蛋白的泛素化与去泛素化的动态平衡过程对于维持细胞的内稳态非常重要。由去泛素化酶USP1-UAF1复合物介导的单泛素化的FANCI-FANCD2复合物的去泛素化,以拮抗FA核心复合物的功能。因此,USP1-UAF1复合物防止了低保真性的范可尼途径相关的聚合酶等引起基因组的不稳定。另外,USP1-UAF1复合物可以通过RAD51AP1参与同源重组修复DNA的双链断裂(DSBs)损伤的过程。然而,对于USP1-UAF1复合物是如何在特定的条件下调控这两种非常重要的DNA修复途径还所知甚少。由于USP1在DNA修复中的重要作用,为了保证USP1在合适的时间空间发挥功能,USP1受着蛋白与蛋白相互作用、自切割、降解、磷酸化等多方面调控。 我们获得了状态较好的人源的USP1、UAF1和RAD51AP1蛋白,通过序列比对结合生化数据定位了USP1、UAF1和RAD51AP1相互作用的区域及其关键氨基酸。UAF1的N端的WD40-repeat结构域和USP1的Fingers结构域介导了复合物的形成。UAF1的C端的两个SLDs结构域与RAD51AP1的SIM基序介导了两者的相互作用。UAF1在USP1和RAD51AP1之间起到了桥梁的作用,将两者联系到一起。FA途径是如何偶联同源重组进行ICL损伤修复还所知甚少,UAF1的这种桥梁作用能否从一个新角度来解释这个问题也是我们课题所关注的。我们获得了USP1-UAF1,UAF1-RAD51AP1两种二元复合物和三元复合物USP1-UAF1-RAD51AP1。通过晶体筛选已获得单独的UAF1的晶体和USP1-UAF1复合物的晶体。这些工作为UAF1-USP1复合物在范可尼途径中的结构与功能研究打下了坚实的基础。