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第一部分过度机械牵张对肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架的影响目的：探讨过度机械牵张对肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架的影响,阐明其相关机制。方法：A549细胞株培养鉴定后分组,每组5份,施以相应的处理。实验分为空白对照组(C组)和过度牵张组(S组),S组：予以A549细胞20%的机械牵张2h、4h、6h和8h,分别记为S2组、S4组、S6组和S8组。收集细胞并测定下列指标：流式细胞仪检测细胞凋亡；荧光显微镜下观察F-actin改变；RT-PCR测定RhoA和RacmRNA表达。结果：与C组比较,S组随牵张时间延长凋亡率增加(P<0.05)。F-actin染色结果显示：与C组比较,随着过度牵张时间的延长细胞骨架破坏加重,S8组尤为明显。RT-PCR检测结果显示：与C组比较,Rac mRNA表达进行性降低(P<0.01); RhoA mRNA表达在6h、8h升高,6h时达峰值。结论：随着过度牵张时间的延长,细胞凋亡增加,细胞骨架破坏明显,其机制可能与上调RhoA mRNA表达、抑制Rac mRNA表达密切相关。第二部分机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞损伤的影响及相关机制的研究目的：探讨机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架的影响,阐明其可能的相关机制。方法：A549细胞株培养鉴定后分组,每组5份,施以相应的处理。实验分为对照组(C组)、过度牵张6h组(S6组)和预牵张组(P-S组),S6组：予以上皮细胞20%的机械牵张6h,记为S6组；P-S组：预先给予5%机械牵张15min、30min、60min、120min之后将牵张幅度调整为20%牵张6h,记为P15-S6组、P30-S6组、P60-S6组和P120-S6组。所有组别均行流式细胞仪检测细胞凋亡；荧光显微镜下观察F-actin改变；RT-PCR测定RhoA和Rac mRNA表达。结果：与S6组比较,预处理30、60、120min时P-S6组细胞凋亡率下降(P<0.05),预牵张60min时细胞凋亡率最低。F-actin染色结果显示：与S6组比较,P-S6组肌丝重排、断裂减轻,周边肌动蛋白丝带清晰,以预牵张60min时更优。RT-PCR检测结果显示：与S6组比较,P-S6组RhoA mRNA表达均明显下降(P<0.01)；Rac-1mRNA表达仅在预处理30、60min时差异有统计学意义(P<0.05)。结论：给予5%机械牵张预处理可通过抑制RhoA mRNA表达而上调Rac-1mRNA表达,从而减轻20%过度牵张所致的肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架破坏。