【摘 要】
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目的筛选与结直肠癌预后相关的微小RNA（Micro ribonucleic,miRNA）,研究筛选出的miR-5683对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并预测其靶基因及作用通路。方法从TCGA数据库下载结直肠癌患者的miRNA信息,通过生物信息分析的方法从中筛选出与结肠癌预后相关的miRNA,按风险比率（Hazard Ratio,HR）值从高到低查阅文献,选择HR值较高且研究较少的miR-5683为
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目的筛选与结直肠癌预后相关的微小RNA（Micro ribonucleic,miRNA）,研究筛选出的miR-5683对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并预测其靶基因及作用通路。方法从TCGA数据库下载结直肠癌患者的miRNA信息,通过生物信息分析的方法从中筛选出与结肠癌预后相关的miRNA,按风险比率（Hazard Ratio,HR）值从高到低查阅文献,选择HR值较高且研究较少的miR-5683为研究目标,下载TCGA数据库中结直肠癌患者的临床资料,分析miR-5683表达量和患者的生存时间、临床分期和微卫星不稳定性等方面的临床相关性,通过多因素分析及回归分析等方法,研究该基因对结直肠癌患者的预后影响;收集结直肠癌患者肿瘤标本42例,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time ploymerase chain reaction,q PCR）的方法分别检测癌与癌旁组织标本中miR-5683的表达水平,将miR-5683-inhibitor和NC-inhibitor转染SW480和HT29结直肠癌细胞株,敲低miR-5683的表达并通过q PCR方法对转染结果加以验证;之后分别通过细胞增殖实验、划痕实验和细胞侵袭实验检测被miR-5683-inhibitor和NC-inhibitor转染后的结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的差异性;用生物信息分析预测miR-5683的靶基因和信号通路。结果1结合以往文献回顾及通过生物信息分析,筛选出与结直肠癌预后相关的miRNA为miR-5683。对TCGA数据库中结直肠癌患者的临床数据进一步分析,miR-5683的表达量与结直肠癌患者的总生存时间呈负相关（P＜0.05）,与临床分期和微卫星不稳定性的未见相关性（P＞0.05）。2通过q PCR验证结直肠癌患者样本,miR-5683在肿瘤组织中呈现高表达（P＜0.05）。细胞转染的结果也经q PCR证实,与NC-inhibitor组（对照组）相比,miR-5683-inhibitor转染的SW480结肠癌细胞系和HT29结直肠癌细胞系中的miR-5683的表达量明显下调（P＜0.05）。细胞增殖实验提示:与对照组相比,miR-5683-inhibitor转染的SW480和HT29细胞株的光密度值明显下降（P＜0.05）。划痕实验的结果表明:与对照组相比,SW480和HT29肠癌细胞系在转染miR-5683-inhibitor 24 h和48 h后,细胞的迁移率与对照组相比显著降低（P＜0.05）。侵袭实验的结果显示:敲降miR-5683后,结直肠癌细胞系的侵袭能力明显减弱（P＜0.05）。3生物信息分析结果:miR-5683可能的靶基因是CTNNB1、UBA52、JUN、ALB、AR、STAT1、BPTF、SMAD2、UBE2N、NR3C1;可能通过泛素介导的蛋白质水解、钙信号通路、Ras信号通路和Wnt信号通路等发挥生物学作用。结论1通过TCGA数据库筛选及文献筛选出的与结直肠癌预后相关的一种新型生物学标志物为miR-5683。2 miR-5683在结直肠癌组织中的高表达,敲降miR-5683可以抑制HT29和SW480肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭。3 miR-5683可能主要靶向CTNNB1、UBA52、JUN等基因,调节泛素介导的蛋白质水解、钙信号通路、Ras信号通路等发挥生物学作用。图 15 幅;表 9 个;参 211 篇。
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