【摘 要】
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目的:探讨MAL基因敲除小鼠哮喘模型中CADM1的表达及IL-8、TSLP的变化情况。方法:预备无特定病原体（SPF）级野生型C57bl/6j品系健康小鼠,体重约20±3g雌雄各8只,SPF级MAL基因敲除C57bl/6j品系健康小鼠,体重约20±3g雌雄各8只,适应性喂养7天。野生型小鼠按随机数表法分为A、B两组,每组各8只,雌雄各半,敲基因小鼠按随机数表法分为C、D两组,每组各8只,雌雄各半。
【基金项目】
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国家自然科学基金项目:基于MAL调控CADM1的转运探究柴朴汤对肝郁型哮喘小鼠气道上皮细胞的影响和分子机制（81873282）；
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目的:探讨MAL基因敲除小鼠哮喘模型中CADM1的表达及IL-8、TSLP的变化情况。方法:预备无特定病原体（SPF）级野生型C57bl/6j品系健康小鼠,体重约20±3g雌雄各8只,SPF级MAL基因敲除C57bl/6j品系健康小鼠,体重约20±3g雌雄各8只,适应性喂养7天。野生型小鼠按随机数表法分为A、B两组,每组各8只,雌雄各半,敲基因小鼠按随机数表法分为C、D两组,每组各8只,雌雄各半。具体分组:野生型正常组（A组）、野生型哮喘组（B组）、MAL基因敲除正常组（C组）、MAL基因敲除哮喘组（D组）。哮喘造模阶段:B、D组小鼠第1天、第13天给与每只氢氧化铝（Al（OH）3）400ug和卵蛋白（OVA）10ug混合液,用生理盐水调配成0.2ml进行腹腔注射致敏。第14天时,每只小鼠放置于独立自制雾化箱中,保持密封环境,雾化吸入1%OVA激发支气管哮喘,连续7天,雾化1次/日,每次连续半小时。A、C组以等量生理盐水、同时间同条件进行处理对照。最后一次雾化结束24h后,腹腔注射麻醉,脱颈处死小鼠,灌洗小鼠肺泡并手工计数嗜酸性粒细胞（ESO）数目;取肺组织行苏木素-伊红（HE）染色及过碘酸-雪夫（PAS）染色进行病理分析;蛋白印迹（WB）检测T细胞分化蛋白（MAL）、细胞黏附分子1（CADM1）、白细胞介素-8（IL-8）、胸腺间质淋巴细胞生长因子（TSLP）蛋白在各组小鼠肺组织中的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-q PCR）检测小鼠肺组织MAL、CADM1、IL-8及TSLP的m RNA相对表达量。结果:1.支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数提示野生型哮喘组较野生型正常组计数明显增高,并且有统计学意义（P＜0.05）,敲基因正常组较之差异无显著性（P＞0.05）,敲基因哮喘组较敲基因正常组嗜酸性粒细胞计数表达差异有统计学意义（P＜0.01）。2.HE染色示野生型正常组小鼠支气管管腔无特殊变化,管腔周边无明显炎性细胞浸润,管腔完整;野生型哮喘组小鼠可见支气管管腔发生狭窄,并且管腔边缘增厚,存在断裂,上皮细胞出现增厚,管腔周边有炎性细胞浸润;敲基因正常组小鼠支气管管腔稍增厚,边缘稍不完整,管腔周边少许炎性细胞浸润;敲基因哮喘组支气管管腔见明显增生,支气管管壁不完整,破坏严重。PAS染色示野生型正常组小鼠气道无特殊病理改变,管腔正常,无明显杯状细胞增生;野生型哮喘组小鼠支气管管腔可见狭窄,可见杯状细胞增生,且体积膨大,无明显粘液栓形成;敲基因正常组小鼠肺组织管腔边缘不完整,可见少许杯状细胞增生,管腔中可见少许粘液栓;敲基因哮喘组较野生型哮喘组管腔可见明显增生,管壁不完整,大量杯状细胞增生,管腔内可见大量粘液栓。3.WB结果显示野生型哮喘组较野生型正常组MAL蛋白表达量明显下降,有统计学意义（P＜0.05）,敲基因正常组及敲基因哮喘组MAL蛋白均不表达。野生型哮喘及敲基因正常组较野生型正常组CADM1蛋白表达量均下降,且有统计学意义（P＜0.05）,敲基因哮喘组较敲基因正常组及野生型哮喘组CADM1蛋白相对表达量升高,并且有统计学差异（P＜0.05）。野生型哮喘组较野生型正常组IL-8蛋白表达升高,有统计学意义（P＜0.05）,敲基因哮喘组较敲基因正常组及野生型哮喘组IL-8蛋白无变化（P＞0.05）。野生型哮喘组、敲基因正常组较野生型正常组TSLP蛋白表达量均升高,且有统计学意义（P＜0.05）,敲基因哮喘组较野生型哮喘组及敲基因正常组TSLP表达量均下降,且有统计学意义（P＜0.05）。4.RT-q PCR显示野生型哮喘组MALm RNA表达量明显下降,有统计学意义（P＜0.01）,敲基因哮喘组及敲基因正常组MALm RNA均不表达。野生型哮喘组及敲基因正常组CADM1m RNA的相对表达量较野生型正常组均降低,且有统计学意义（P＜0.01）,敲基因哮喘组较敲基因正常组及野生型哮喘组CADM1m RNA表达量升高,有统计学意义（P＜0.01）。野生型哮喘组及敲基因正常组IL-8 m RNA的相对表达量均高于野生型正常组（P＜0.01）,敲基因哮喘组较敲基因正常组及野生型哮喘组IL-8m RNA表达量均低,且有统计学意义（P＜0.01）。野生型哮喘组及敲基因正常组较野生型正常组TSLPm RNA的相对表达量升高,且有统计学意义（P＜0.01）,敲基因哮喘组较敲基因正常组及野生型哮喘组TSLPm RNA表达量均降低,且有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.MAL基因影响CADM1、IL-8、TSLP在哮喘小鼠中的表达。
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