目的: 观察中药复方消可宁颗粒对高糖培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)生长的影响，针对高糖对内皮细胞氧化损伤机制，初步探讨消可宁是否具有抗氧化应激保护血管内皮细胞的作用及可能机制。 方法: 1.体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)，分为七组：常规培养组：葡萄糖浓度为5.5mM；高糖对照组：葡萄糖浓度为30mM；不同浓度消可宁组(消可宁浓度按生药计算，分别配制成终浓度为20g/L、40g/L、60g/L、80g/L、100g/L，葡萄糖浓度为30mM)；分别培养12、24、48小时。 2.细胞HE染色，观察细胞的形态变化。 3.采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法测定细胞增殖活性，观察高糖以及不同浓度消可宁对ECV-304细胞生长的影响。 4.生化测定细胞上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、超氧阴离子(supeoxide，O2)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XOD)及总一氧化氮合酶(total nitric oxide synthase，TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(induce nitric oxidesynthase，iNOS)、一氧化氮(nitric oxide，NO)的活性或含量。 5.免疫组织化学法检测各组细胞中过氧亚硝酸阴离子(peroxynititrite，ONOO)生成标记物--硝基酪氨酸(nitrotyrosine，NT)。6.Western blot测定各组细胞上清液中内皮细胞型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达。 结果: 1.各组内皮细胞形态观察，细胞培养48小时，高糖对照组细胞变小变圆，部分细胞脱落，随消可宁剂量增大，作用时间延长，上述现象逐渐减少。 2.MTT实验结果显示：高糖引起ECV-304细胞生长抑制，消可宁则可减轻其抑制，但只有在消可宁作用48h时出现统计学意义，与常规培养组相比，高糖对照组及20～60g/L消可宁组细胞生长抑制率均较高，差异有统计学意义(t分别为4.5755，4.2092及3.2561，P<0.05或<0.01)。80、100g/L消可宁组减轻高糖对内皮细胞的生长抑制，差异具有统计学意义(t值分别为2.9077，3.5128；P<0.05)，而与常规培养组的差异无统计学意义(t=1.6678，1.0627；P>0.05)。 3.各组生化指标改变：(1)与常规培养组比较，其余各组内皮细胞SOD活力均减低，XOD活性及O2-均有升高，以高糖对照组尤为明显，各消可宁组SOD活力有所恢复，XOD活性及O2-较高糖对照组减低，并具剂量和时间依赖性。O2-与SOD和XOD的相关性分析显示，与SOD成负相关(r=-0.838，P<0.01)，与XOD呈正相关(r=0.606，P<0.01)；(2)高糖对照组中eNOS活力降低、iNOS活力升高和NO产生增加最为明显，消可宁组细胞eNOS活力有所恢复，iNOS活力及NO得到有效控制，且具有剂量时间依赖性。 4.免疫细胞化学染色结果显示：与常规对照组比较，高糖对照组内皮细胞中NT的表达率高，随着消可宁浓度的增加，NT表达率逐渐减少，100g/L消可宁组细胞中NT表达率较常规对照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。 5.Western blot蛋白测定结果显示：高糖对照组eNOS蛋白的含量最低并具统计学意义(P<0.05)，消可宁各组细胞总蛋白中eNOS蛋白的含量恢复或增加。 结论: 1.高糖引起ECV-304细胞氧化损伤，对其生长具有明显抑制作用，并具有时间依赖性；而消可宁可以减轻高糖对内皮细胞的生长抑制，保护内皮细胞，并具有浓度和时间依赖性。 2.消可宁具有抗氧化作用，对高糖状态下ECV-304细胞保护机制可能为：(1)消可宁有效的抑制细胞内XOD活性、减少了O2-产生，同时提高了SOD活性，促进O2-清除；(2)消可宁在一定程度上能够恢复eNOS活性，抑制iNOS的活性，减少NO，继而明显减少ONOO-产生。