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Pyk2是非受体酪氨酸激酶的一种,属于黏着斑家族,是在进化上非常保守的蛋白质。Pyk2的活化需要磷酸化,Pyk2的磷酸化包括自我磷酸化和被动磷酸化,这对Pyk2的激活和功能的发挥有着极其重要作用。对于Pyk2的研究,目前主要集中于体细胞中,并发现其功能具有多样性;活化后的Pyk2参与多种细胞信号的传导,因此对细胞的增殖、凋亡、粘附、迁移等过程发挥着极其重要的作用。Pyk2在生殖方面的研究还不多见。目前多项研究发现,Pyk2参与一些肿瘤细胞的迁移和增殖的过程,由于早期胚胎细胞迁移与增殖的过程与肿瘤细胞类似,因此Pyk2在早期胚胎发育过程中可能发挥着重要作用,但是类似的研究鲜有报道。另外本实验室已经发现,在早期胚胎发育过程中未活化的Pyk2蛋白在细胞中大量存在,而且大量聚集在细胞核当中,因此本研究利用实时荧光PCR、免疫细胞化学以及RNA干扰等方法研究磷酸化的Pyk2在小鼠受精作用以及早期胚胎发育过程中扮演的角色,为进一步研究奠定基础。 研究发现在小鼠卵母细胞体内受精过程中P-Pyk2除了均匀分布于细胞质中外,还特异性的在雌雄原核中聚集,并在形成原核过程中慢慢聚集。在小鼠体内受精早期胚胎发育的研究发现,在胚胎发育的到8-细胞之前,P-Pyk2在细胞质中均匀地分布,在细胞核中大量的聚集,并且环绕在核仁周围。当卵裂球处于分裂期时,P-Pyk2环绕分布于染色体周围。随着胚胎发育的进行,p-Pyk2在细胞核中聚集逐渐消失,当发育到囊胚期时,在核中已经监测不到P-Pyk2的分布,但是P-Pyk2主要聚集在囊胚滋养层细胞皮质中。 我们研究Pyk2在胚胎中的表达量后发现,受精卵发育到2-细胞时,Pyk2的表达量先是下降,到4-细胞时又升高,这可能是当合子基因开始转录引起的。为了进一步探究Pyk2对于小鼠早期胚胎发育的影响,我们利用RNA干扰的方法下调Pyk2的表达。注射Pyk2siRNA的胚胎与对照组相比,在体外发育过程中存在较明显的差异,Pyk2下调后,2-细胞率,4-细胞率以及8-细胞率都不同程度的下降,这说明,Pyk2在早期胚胎发育过程中起到了一定的作用。但是实验组的胚胎依然有许多胚胎能发育到囊胚期,这可能是因为酪氨酸激酶在结构上以及功能上的相似性,一种酪氨酸激酶缺失,其他酪氨酸激酶可能会起到弥补的作用。