论文部分内容阅读
目的MPT64是结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)早期分泌蛋白的主要成份,本研究则探讨应用MPT64作为快速检测结核分枝杆菌生长指示的可能性,以期建立一种准确、快速、简便、易于普及开展的结核分枝杆菌生长检测方法。并对应用MPT64检测鉴定结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex, MTC)进行了方法学评价。方法1、应用MPT64为靶标快速检测结核分枝杆菌生长对4株结核分枝杆菌1mg/ml纯培养物菌液进行10倍倍比稀释,得到32例菌悬液,将其接种于BacT/ Alert 3D全自动分枝杆菌培养系统的培养基中进行培养;选择32例临床送检样本(涂片抗酸染色阳性)以及64例临床随机送检样本接种于BacT/ Alert 3D全自动分枝杆菌培养系统的培养基中进行培养,培养阳性的样本进行菌种鉴定。同时,对菌悬液进行MPT64检测,当高浓度MPT64检测阳性时,即对下一浓度每天进行1次MPT64检测;对抗酸涂片染色阳性样本的培养液每天进行1次MPT64检测,阴性者检测至培养阳性出现或至培养42天;对临床随机送检样本的培养液则每周定时进行1次MPT64检测,阴性者检测至培养6周。2、应用MPT64检测鉴定结核分枝杆菌复合群对23株参考菌株,同时接种于BacT/ALERT 3D系统的液体培养液和改良罗氏固体培养基中,对这两种样本都采用结核分枝杆菌胶体金法诊断试剂进行MPT64分泌蛋白检测。而对133株临床送检分离菌株,BacT/ALERT 3D系统分离培养的菌株直接应用其液体培养基上清液进行检测,对于改良罗氏固体培养基分离培养的菌株,则应用生理盐水将细菌振摇混匀制备成浊度为1麦氏单位的生理盐水菌悬液,室温静置2h后取上清液进行检测,而后与菌种鉴定结果相比较。结果1、(1)分枝杆菌纯培养物菌液稀释试验显示:应用MPT64作为快速检测结核分枝杆菌生长指示的最小菌量为10-7～10-6mg/ml,BacT/ALERT 3D仪器系统培养法为10-6～10-5mg/ml。(2)32例涂片抗酸染色阳性样本中有31例BacT/ALERT 3D仪器培养阳性,检出时间为6～30天,平均13.7天。其中菌种鉴定为结核分枝杆菌的29例样本中有28例MPT64检测阳性,检出时间为3～16天,平均7.8天。其余2例菌种鉴定为非结核分枝杆菌的培养物MPT64检测阴性。(3)64例临床随机送检样本中15例BacT/ALERT 3D仪器培养阳性,检出时间为7～39天,平均19.2天,其中菌种鉴定为结核分枝杆菌的13例样本MPT64检测全部阳性, MPT64检测阳性结果均在4周内呈现;在49例培养阴性样本中有2例MPT64检测阳性,分别在培养3、4周末检出,增补结核分枝杆菌DNA扩增实验,结果阳性;其余47例MPT64检测阴性培养样本和2例菌种鉴定为非结核分枝杆菌培养样本培养物在培养6周末时MPT64检测均为阴性。(4)以BacT/ALERT 3D快速培养系统方法为参照,应用MPT64检测指示结核分枝杆菌生长方法的敏感性为97.61%、特异性为96.29%。2、对23株分枝杆菌参考菌株、133株临床分离菌株进行了MPT64检测。(1)对于参考菌株的两种样本,MPT64检测结果均为:结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌菌株阳性,其它20株非结核分枝杆菌为阴性。分群鉴定准确度为100%。(2)在BacT/ALERT 3D系统分离培养的56株临床菌株中,27株鉴定为结核分枝杆菌,其中25株MPT64检测阳性;29株鉴定为非结核分枝杆菌,其中27株MPT64检测阴性。分群鉴定准确度为92.85%。(3)在改良罗氏培养基分离培养的77株临床菌株中,58株鉴定为结核分枝杆菌,其中55株MPT64检测阳性;19株鉴定为非结核分枝杆菌,MPT64检测全部阴性。分群鉴定准确度为96.11%。(4)对于所有研究样本,应用MPT64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群的敏感度、特异度与准确度分别为94.31%、97.06%和95.51%。结论1、应用MPT64分泌蛋白为靶标快速检测结核分枝杆菌生长,结果准确、快速,操作简便,但在如何确定最佳检测时间点则需要进一步探讨。2、应用MPT64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群是一种准确、快速、简便而又不需要任何仪器设备的实用型方法,值得临床推广应用。