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目的:肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是目前儿童慢性粒系白血病传统治疗失败的重要原因之一,同时也是当前研究热点。我们的研究致力于探讨TRIB2基因敲低后的人慢性粒细胞白血病细胞(K562/ADM细胞)对阿霉素耐药性和增殖情况的变化,进一步研究敲低TRIB2后逆转K562/ADM细胞耐药性可能存在的分子机制,为临床上治愈白血病提供相应的分子治疗靶点。方法:1.构建靶向敲低TRIB2的质粒载体并转染K562/ADM细胞,使用未转染的K562/ADM细胞作为实验对照组。转染48小时后,使用G418筛选获得稳定的阳性实验组细胞。然后利用Western blot、RT-PCR和RT-qPCR分析证实TRIB2基因敲低表达的效果。2.将成功敲低TRIB2表达的K562/ADM-TRIB2细胞及其亲代K562/ADM细胞放置于37℃,5%CO2培养箱中培养,并分别于24h、48h、72h后使用CCK-8法检测细胞增殖情况。另外将5M ADM单独加入各细胞组,孵育1小时后,使用FACSCalibur流式细胞仪检测胞内ADM的平均荧光强度(MFI)。3.从K562/ADM-TRIB2细胞和亲代K562/ADM细胞中提取总RNA或蛋白质,进行RT-PCR和RT-qPCR检测相对耐药基因MDR1,MRP1的表达,用Western blot检测上述基因翻译水平的差异情况。4.Western blot检测K562/ADM-TRIB2细胞和阴性对照组中ERK通路的表达差异,包括p-ERK和STAT3蛋白,然后使用ERK特异性阻断剂U0126进一步证明。结果:1.在G418选择4周后,我们成功获得了稳定敲低TRIB2的K562/ADM-TRIB2 细胞。RT-PCR,RT-qPCR 和 Western blot 分析显示,与 K562/ADM 组相比,实验组在转录和翻译水平上TRIB2表达显着降低;同时敲低TRIB2的细胞增殖受到了显着抑制,而它的亲代细胞没有明显变化(P<0.05)。2.CCK-8检测显示ADM对K562/ADM-TRIB2组的IC50值下降明显,逆转倍数为K562/ADM细胞的12.12(P<0.01);流式细胞仪检测显示K562/ADM-TRIB2细胞内ADM的积累量明显高于 K562/ADM 细胞(P<0.01)。3.Western blot、RT-PCR 和 RT-qPCR 结果显示K562/ADM-TRIB2细胞中MDR1和MRP1的表达水平低于K562/ADM细胞(P<0.05)。4.在K562/ADM-TRIB2细胞中p-ERK和STAT3的表达明显下调。用ERK通路特异阻断剂U0126处理后,K562/ADM-TRIB2细胞中p-ERK和STAT3的表达显著降低(P<0.05),这些结果表明TRIB2的下调通过改变K562/ADM细胞中p-ERK和STAT3的表达来影响细胞耐药性。结论:敲低TRIB2表达后的K562/ADM细胞中MDR1和MRP1的表达显著降低,由于MDR1和MRP1的下调,使得敲低TRIB2后的K562/ADM细胞内ADM积聚量增加。因此K562/ADM细胞对ADM的敏感性增强,并且细胞增殖受到了抑制。我们的研究还发现ERK信号通路蛋白表达在下调TRIB2表达后也受到了抑制,表明ERK通路参与K562/ADM细胞耐药和增殖。