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蛋白质和核酸是组成生命的主要生物大分子,研究蛋白质和核酸的相互作用,发展能对重要蛋白质进行实时检测的高灵敏度的分析方法是后基因组时期重要的研究领域之一。
本论文工作围绕发展荧光光谱法研究DNA/蛋白质相互作用性质机理以及利用DNA/蛋白质特异相互作用发展蛋白质检测新方法两个方面开展工作,论文的主要内容包括:
1.利用荧光各项异性法详细研究了DNA甲基化转移酶M.EcoR I与两种不同链长DNA的相互作用,得到不同温度下的结合常数和它们结合的热力学参数。表明M.EcoR I与短链DNA的结合强于与长链DNA的结合。M.EcoR I与靶向DNA的结合过程是熵驱动的。为理解DNA和M.EcoR I相互作用机理和调控DNA和M.EcoR I的结合提供了新的信息。
2.用荧光共振能量转移的方法研究了M.EcoR I与标记荧光给体和受体的DNA结合后诱导的DNA弯曲,在溶液中直接测得DNA的弯曲角度为57.8°。
3.进一步探讨了在单分子水平研究M.EcoR I诱导DNA弯曲的实验方法和条件。实现了单对荧光分子标记DNA的双波长同时成像,为利用单分子荧光共振能量转移研究DNA弯曲打下了基础。
4.利用单链DNA核酸适体既可以与靶蛋白特异结合又能与互补寡聚核苷酸形成双链的特点,以α-凝血酶为模型体系,发展了一种基于核酸适体和DNA光开关配合物[Ru(phen)2(dppz)]2+的蛋白质检测新方法,该方法具有灵敏度高、选择性高,无需对核酸适体进行荧光标记,适合于不同构象核酸适体等优点,对于促进核酸适体在生物分子的实时监测分析、生物传感器等方面的应用有重要意义。