日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库的构建与东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因筛选

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日本血吸虫病(Schistosomiasis japonica)是我国一种危害严重的人畜共患寄生虫病。东方田鼠是迄今发现的唯一一种具有抗血吸虫病作用的哺乳动物。如能筛选、克隆出东方田鼠抗血吸虫抗性相关的日本血吸虫基因,可以为开发抗血吸虫疫苗和治疗药物提供新技术、新思路。噬菌体展示技术(phage display)是近年建立和发展起来的利用噬菌体融合表达外源基因的一项新技术,已广泛应用于分子间识别机制的研究。本研究首次应用T7噬菌体展示系统构建了日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,并用东方田鼠阴性血清筛选该文库,以期筛选到与东方田鼠抗血吸虫抗性相关的日本血吸虫基因。方法与结果1.日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库的构建:原始文库的库容量为4.98×106pfu,扩增后文库滴度为3.85x 1011pfu/ml。对随机挑取的96个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为93.8%,其中95.6%的插入片段大于300 bp。7种特异性引物均能从文库中钓取到日本血吸虫成虫相关基因。2.东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因的筛选:分离东方田鼠阴性血清,用亲和淘洗的方法筛选文库。经三轮筛选,阳性克隆得到有效富集,共获得10种目的基因的EST序列,其中7种与GenBank中登陆的日本血吸虫基因序列具有高度相似性,相似性达到99%~100%;1种与其他物种基因有82%相似性,另外2种没有发现显著相似的基因。功能预测结果表明,部分EST编码的蛋白或多肽分子功能主要是结合作用、酶活性及结构蛋白。结论本研究成功构建了日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,并利用东方田鼠阴性血清成功筛选到10种目的基因的EST序列,为深入阐述东方田鼠抗血吸虫分子机理和寻找新候选疫苗抗原分子奠定了基础。
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