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丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌(HCC)的主要原因,对人类健康造成了严重的危害。丙型肝炎尚无有效的疫苗预防,且治疗手段有限。目前治疗丙型肝炎的标准疗法是聚乙二醇干扰素α(PEG-IFN-α)联合利巴韦林,存在耐受性差,应答率夏低(只有约50%的病人可以产生持续的病毒学应答)等缺陷。因此,研究高效抗HCV药物成为亟待解决的问题。
本研究首先建立了适用于大规模筛选抗HCV活性化合物的方法:通过对带有报告基因的HCV细胞模型中报告基因表达水平的检测,来反映HCV的复制水平,从而确定化合物对HCV的抑制活性。同时,通过Real time PCR检测胞内HCV-RNA复制水平。在此基础上,我们对大量化合物进行了抗HCV活性筛选,发现了一个新型非核苷类小分子化合物系列--色胺系列化合物中的代表性化合物QH-91具有良好的抗HCV活性。在HCV亚基因组复制子细胞模型和HCV全基因组感染系统上,QH-91与细胞共培养72小时后,细胞质中的丙型肝炎病毒RNA水平及病毒蛋白翻译水平均呈浓度依赖性减少。在与干扰素的联合用药中,QH-91表现出与干扰素具有一定的协同效应。
在对QH-91抑制HCV复制的机制研究过程中,我们发现:当细胞中蛋白激酶C(PKC)的活性受到抑制时,QH-91的抗HCV活性也受到影响;对QH-91与PKC直接关联性的进一步研究发现,QH-91可以通过增加PKC磷酸化水平,使PKC活化,进而激活在干扰素信号通路中发挥重要抗病毒作用的STAT1蛋白;另外运用PKC的激活剂也显示有抗HCV作用,说明细胞内PKC活性的增强与抑制HCV复制具有一定的关联性。
综上所述,我们通过对大量化合物抗HCV活性的筛选,发现了色胺系列化合物中一个具有较强抗HCV活性的小分子化合物QH-91,其抗病毒作用机理的研究揭示其与激活细胞内PKC的活性存在一定的关联性。QH-91如何激活PKC的作用方式有待进一步深入研究。