论文部分内容阅读
鹿茸是传统名贵中药,具有温肾壮阳、益精补血、强筋健骨等功效。鹿茸的化学成分比较复杂,含有多种重要的活性物质:如不饱和脂肪酸和溶血卵磷脂等具有降低血压、治疗心血管疾病的作用;对羟基苯甲醛（PHBD）、次黄嘌呤和磷脂等具有抑制单胺氧化酶（ MAO）的作用;雌激素、孕酮等激素对女性更年期综合症有预防和治疗作用;胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-1）和生长激素（GH）可促进生长发育、用来治疗糖尿病、骨质疏松等疾病。现有的鹿茸加工方式比较粗放,产品结构单一,为进一步拓宽鹿茸的市场应用空间,提高其附加值,本课题采用超临界流体萃取技术、超声波强化提取技术和其它蛋白质分离纯化技术,从鹿茸中提取三类功效明确、在临床上具有重要应用价值的活性成分:包括单胺氧化酶抑制剂、天然雌激素和IGF-1等活性多肽。采用动态法实验测定了PHBD在超临界CO2中的溶解度;另外还对利用干酵母（S. cerevisiae）细胞作为囊壁材料制备微胶囊进行了初步研究。首先采用超临界CO2萃取水炸干鹿茸中具有抗衰老作用的单胺氧化酶抑制剂。通过对萃取温度、萃取压力、夹带剂种类和原料粒度的考察,确立最佳萃取工艺条件,提取率可以达到3.58%,萃取物对MAO-B的总抑制活性可以达到3319.13 U/g。萃取物对MAO-B的抑制作用呈明显的量效关系:当萃取物溶液的浓度为278.15 mg/L时,对MAO-B的抑制作用达到93.77%,但对MAO-A的抑制率只有24.18%。利用HPLC、TLC、GC、GC-MS和放射免疫分析等方法对萃取物的化学组成进行分析,萃取物中除含有对MAO有抑制作用的活性成分次黄嘌呤、对羟基苯甲醛和磷脂外,还含有不饱和脂肪酸、谷甾醇、维生素E、甾体化合物、胆固醇、雌二醇、睾酮和孕酮等物质。另外,采用超临界流体萃取和浓缩干鹿茸中的雌激素,雌二醇提取率可以达到0.3342 ng/g鹿茸。萃取物中雌二醇和孕酮含量分别为48.42 ng/g和197.04 ng/g ,有望作为开发成预防和治疗女性更年期综合症产品的原料。采用超声波强化提取鲜鹿茸中的IGF-1。考察了溶液种类和pH、浸提温度、浸提时间、浸提液用量、浸提次数及超声功率等因素的影响。以pH10.0的I号缓冲液作浸提液,IGF-1的提取率可以达到5279.29 ng/g鲜茸。采用超声波强化提取具有提取率高、提取速度快的优点。选用10 kDa的超滤膜,将IGF-1粗提液浓缩6～10倍,IGF-1损失率仅为2.49%,且超滤浓缩速度快。利用无水乙醇去除杂蛋白质的效果最佳,杂蛋白质去除率为91.59%,IGF-1含量提高8.97倍,IGF-1损失率为24.52%。通过阳离子交换层析,总蛋白中IGF-1的含量提高了12.01倍,IGF-1和蛋白质的回收率分别为91.73%和66.85%。进一步通过SDS-PAGE和高效毛细管电泳鉴定,表明鲜鹿茸提取液中含有IGF-1。另外,通过放射免疫分析法检测,鹿茸的IGF-1粗提液中还含有生长激素。以鹿茸冻干粉为原料,首先采用超临界纯CO2萃取鹿茸中的单胺氧化酶抑制剂等脂类活性物质,然后采用溶剂浸提萃余物中IGF-1等活性多肽。结果表明,综合提取鹿茸中的脂类活性物质和IGF-1等多肽是可行性的。利用动态法实验测定了对羟基苯甲醛（PHBD）在超临界CO2中的溶解度,考察改变温度或压力对其溶解度的影响。当温度恒定时,PHBD在超临界CO2中的溶解度随压力增加而增大;PHBD溶解度随温度变化趋势比较复杂。利用溶解度与压力和对比密度两个经验方程进行关联,关联误差在3.67～11%之间,表明这两个方程可用于PHBD在CO2中溶解度的关联。利用PR-EOS计算值较实验结果有较大误差。分别以丁香油和水杨酸甲酯为囊芯,以干酵母细胞作为囊壁材料制备一种新型的微胶囊。通过对包埋温度、芯材比及包埋时间等因素的考察,确定了最佳制备工艺条件,微胶囊中丁香油包埋率可以达到41.26%,而水杨酸甲酯包埋率为48.58%。通过显微镜和电镜观察,微胶囊呈规则的球形,大小均一,直径在2.0～4.0μm之间。这种新型的微胶囊制备方式,具有操作简单、包埋率高、不引入有机溶剂的特点,适合制备药物、食品添加剂等囊芯的微胶囊。