板栗壳色素的提取及其银纳米复合材料制备和抑菌活性研究

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栗(Castanea mollissima)是壳斗科(Fagaccac)栗属(Castanea)别名板栗,风栗,魁栗,毛栗,是农林经济中的一种重要树种,在我国广泛种植。板栗壳大多数作为加工废弃物用作燃料,未得到开发利用,造成资源浪费和环境污染。由于板栗壳中含有丰富的活性成分,特别是含有一定量的黄酮类色素,是一种水溶性好、着色力强、性质稳定的天然棕色素,且具有抗氧化、抑菌等活性,还可作为制备银纳米材料的还原剂和稳定剂,具有绿色、安全等优点。本论文利用超声-微波辅助法提取板栗壳色素,经过对板栗壳色素提取条件的优化,确定最佳提取工艺参数,按照此工艺参数进行板栗壳色素生物活性测定和成分分析鉴定,之后以板栗壳色素作为还原剂和稳定剂,利用水热合成法制备银纳米材料,通过UV-Vis、FTIR、TEM、XRD和XPS对其进行表征,最后通过抑菌圈(ZOI)实验和最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测试对板栗壳色素-银纳米材料的抑菌性进行初步研究,旨在为综合利用开发板栗壳资源提供基础实验数据和依据。1、首先通过超声-微波辅助法提取板栗壳色素,以色素色价作为衡量标准来优化提取效果。通过单因素试验筛选出影响提取板栗壳色素的主要因素水平,再通过正交试验确定最佳提取工艺参数,实验结果显示乙醇体积分数50%、固液比1:20(g/m L)、微波加热温度70℃,在此提取工艺参数下板栗壳色素的色价为34.1,得率是5.8%。2、对板栗壳色素进行生物活性测定和化学成分分析。采用清除DPPH·、O2-·和·OH法来测定板栗壳色素的抗氧化活性,实验结果表明,板栗壳色素具有一定的抗氧化活性。更值得注意的是,板栗壳色素对DPPH·和·OH的清除能力较强,最高达到95%和99%,其中板栗壳色素浓度在2.5 mg/m L时对羟基自由基的清除能力与对照抗坏血酸相等。经计算,板栗壳色素对DPPH·、O2-·和·OH的半抑制浓度IC50分别为为2.43 mg/m L、2.0mg/m L、0.65 mg/m L。利用LC-MS/MS对板栗壳色素化学成分进行分析,初步检测结果得到13个化合物,其中包括黄酮类(化合物1、2、10)、萜类(化合物4、5、6)、恩醌类(化合物12)、酚酸类(化合物13)、脂肪酸(化合物3)、糖类(化合物7、11)、生物碱(化合物9)。3、板栗壳色素-银纳米材料的制备及抑菌活性的初步研究。以板栗壳色素作为还原剂和稳定剂,利用水热合成法制备。对反应溶液的p H值和硝酸银溶液的加入量进行了优化。得出优化后的制备条件是:p H值为9.0,加入0.8 m L浓度为5%硝酸银溶液,温度140℃,时间4 h。合成的板栗壳色素-银纳米材料通过UV-Vis、TEM和XRD表征结果显示:制得的纳米材料为板栗壳色素包裹的球形银纳米粒子,平均粒径为8.82 nm,并且具有面心立方晶体结构。抗菌活性试验表明,板栗壳色素修饰的银纳米颗粒对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和白色念珠菌(Candida albicans)均有明显的抑制作用。
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