目的:(1)筛选出适用于提取恰玛古多糖的方法,并优化该提取方法的工艺参数。(2)运用光谱、色谱等分析技术对恰玛古多糖初级结构进行表征,以期为恰玛古多糖的构效关系研究奠定基础。(3)评价恰玛古多糖的降血糖活性和保肝作用,为恰玛古多糖开发成降血糖、保肝药物制剂或保健食品提供参考依据。方法和结果:(1)采用热水浸提法、超声辅助提取法和复合酶法提取恰玛古多糖;通过响应面优化3种提取方法的最佳工艺,比较不同提取方法对多糖提取率的影响。结果:热水浸提最佳工艺为液料比32∶1 m L/g、提取温度92℃、提取时间2.3 h,在此条件下3次验证平均提取率为7.12%;超声辅助提取最佳工艺为液料比33∶1 m L/g、提取温度62℃、超声功率250 W、超声时间43 min,在此条件下3次验证平均提取率为7.32%;复合酶提取最佳工艺为p H 5.0、温度52℃、加酶量2.6%、时间51 min,3次验证平均提取率为7.82%;3种方法得率从高到低为:复合酶法>超声辅助提取法>热水浸提法。此外超声空化与酶解作用相结合,能极大提高多糖提取率,因此后续实验选用超声波与复合酶联用提取恰玛古多糖。(2)超声协同复合酶分步提取恰玛古多糖的工艺研究。在前期研究基础上,以多糖提取率为指标,通过单因素考察和Box-Behnken分析设计,优化超声协同复合酶分步提取恰玛古多糖工艺。结果:在液料比33∶1 m L/g、温度62℃、功率250 W条件下超声43 min后加入2.5%复合酶,调节p H为5.4,温度50℃,酶解52 min,在此条件下多糖提取率为12.62%,与预测值12.79%无显著差异。(3)恰玛古多糖分离纯化及初级结构表征。恰玛古多糖经酶法和Sevage法联用脱蛋白,透析除去低聚糖及其它小分子杂质;初步纯化后经DEAE-52纤维素柱层析及Sephacryl S-200 HR凝胶色谱柱层析进一步纯化,采用紫外可见分光光度法(UV)、傅里叶红外扫描(FT-IR)、气质联用分析(CG-MS)、刚果红实验等对恰玛古多糖进行结构表征。结果:恰玛古粗多糖经柱层析分离纯化得到组分BP-1-1,紫外分析表明多糖组分BP-1-1不含核酸和蛋白质;经红外扫描分析其含有α-糖苷键和糖醛酸;刚果红实验表明多糖组分BP-1-1中可能不存在三螺旋结构;经GC-MS分析多糖组分BP-1-1是由Rha、Ara、Man、Glu和Gal五种单糖组成,面积归一法得到五种单糖的摩尔比为:1.00∶0.76∶1.69∶2.11∶2.07。(4)恰玛古多糖降血糖活性研究。研究恰玛古多糖对高糖高脂联合链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠的体内降血糖活性及对α-葡萄糖苷酶抑制实验的体外降血糖作用;体内降血糖活性考察多糖对小鼠饮水进食、体重、血糖、糖耐量的影响,体外降血糖活性主要通过酶标仪测定吸光度考察多糖对α-葡萄糖苷酶抑制作用。结果:恰玛古多糖对α-葡萄糖苷酶具有一定抑制效应,且抑制效应会伴随多糖质量浓度增大而增强;恰玛古多糖能改善Ⅱ型糖尿病小鼠的精神状态、毛发色泽,缓解多饮、多食、多尿症状,可有效抑制糖代谢紊乱引起的体重下降;并能显著降低患病小鼠的空腹血糖值,改善糖尿病小鼠口服糖耐量。(5)恰玛古多糖对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用研究。建立急性酒精性肝损伤小鼠模型,从血清、肝功能生化指标以及肝组织病理切片等方面,探讨恰玛古多糖对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用。结果:恰玛古多糖可显著降低急性酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST、TG水平以及肝脏中MDA、TG含量和肝脏指数,显著增加肝组织中SOD活性;通过肝组织的病理形态学观察发现,多糖各剂量均可明显减轻小鼠肝细胞损伤。结论:(1)超声协同复合酶分步提取法可适用于提取恰玛古多糖,且该方法提取率较高,因此后续多糖研究采用该提取方法。(2)恰玛古多糖组分BP-1-1不含核酸和蛋白质,但含α-糖苷键和糖醛酸,可能不存在三螺旋结构,但是由5种单糖组成。(3)恰玛古多糖具有降血糖活性,能有效缓解Ⅱ型糖尿病,此外,恰玛古多糖有较好的保肝作用,其在治疗糖尿病和解酒保肝方面具有开发利用前景。