论文部分内容阅读
钝裂银莲花(Anemone obtusiloba)为毛茛科(Ranunculaceae)毛茛亚科银莲花属(Anemone L.)中的一种多年生草本植物，单花顶生，一般产生1-3个独立花茎，花小（1-2cm），花色有黄色、浅黄色和白色三种。目前对钝裂银莲花的研究主要集中在其药用价值、性分配和繁殖分配等方面。本研究结合具体的研究条件，采用ISSR分子标记技术进行钝裂银莲花遗传多样性水平和遗传分化程度的研究，研究结果如下：1.在利用ISSR技术研究钝裂银莲花遗传多样性过程中，从引物筛选，扩增条件，检测方法等几个方面进行优化，建立钝裂银莲花ISSR最适合的反应体系为：20μl的PCR反应体系，含有DNA模板40ng，Mg2+1.2mmol/L，10xPCR Buffer2μl，dNTPs0.3mmol/L，引物0.3mmol/L和6UTaq DNA聚合酶。ISSR-PCR的反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，引物退火45s，72℃延伸90s，循环35次；72℃延伸7min，4℃保存。在此优化条件下，可以得到重复性好，稳定且多态性高的ISSR条带。2.从40对ISSR引物中筛选出13条多态性ISSR引物，13条引物共扩增了4个地域的11个居群共220个个体,共扩增出701条带，其中392条具有多态性,多态性位点百分率为55.92%，每条引物扩增出的条带数为39-73条，平均每条引物扩增的条带数为53.92条，扩增条带在300bp-1200bp之间。钝裂银莲花居群内的多态性位点百分率在27.8%-54.1%之间，平均为42.4%。每个位点的平均有效等位基因数为1.1673。Nei’s基因多样性在居群水平上为0.0578-0.1699之间，平均值为0.1135，在物种水平上为0.2497；shannon信息指数在物种水平上为0.1000-0.2632之间，平均值为0.1830，在物种水平上为0.3719。3.通过Popgene1.32软件分析，钝裂银莲花所有群体的基因多样度(Ht)为0.2551，居群内的基因多样度（Hs）为0.1173,居群间的基因多样度为0.1378，遗传分化系数（Gst）为0.5010，居群间的基因流（Nm）的估测值为每代群体间平均为0.5243。不同环境条件下居群间遗传分化系数随着海拔的升高而升高，而基因流随海拔的升高而降低。用AMOVA分析结果显示：居群间的变异百分率为38%，居群内的变异百分率为62%。即在遗传变异中有38%的变异发生在居群内，有62%的变异发生在居群间，居群内和居群间的差异均极显著（P<0.001）。4.由NTSYS软件得到，钝裂银莲花居群间遗传相似系数的变化范围为0.569-0.917，所有群体间的平均遗传相似系数为0.7027。居群间的遗传距离（GD）变幅为0.0862-0.5642，平均为0.3656。相同环境条件下，钝裂银莲花的遗传相似性变幅小，不同环境条件下，钝裂银莲花的遗传相似变幅较大。以遗传相似系数0.73为基准，11个材料聚为3类，第一类为合作钝裂银莲花，碌曲和阿万仓钝裂银莲花为第二类，阿孜钝裂银莲花为第三类。5.利用SPSS19.0软件作钝裂银莲花遗传多样性指标与环境因子的相关性分析。研究表明钝裂银莲花居群遗传多样性水平与海拔、含水量、有效磷含量有一定的正相关，与经纬度和降雨量有一定的负相关，其中与降雨量的负相关有显著性（P<0.05）。