【摘 要】
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目的:探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6（C1q and tumor necrosis factor related protein 6,C1QTNF6）对大鼠大脑中动脉缺血再灌注（Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R）后血脑屏障结构及紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠,随机分为假手术（Sham）
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目的:探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6（C1q and tumor necrosis factor related protein 6,C1QTNF6）对大鼠大脑中动脉缺血再灌注（Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R）后血脑屏障结构及紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠,随机分为假手术（Sham）组、MCAO/R组、sh RNAC1QTNF6组,建模前两组大鼠通过尾静脉注射生理盐水,sh RNA-C1QTNF6组大鼠注射慢病毒载体进而沉默C1QTNF6的m RNA水平,三组大鼠转染3天后,用改良线栓法构建大鼠脑缺血再灌注（MCAO/R）模型,缺血2 h,再灌注24 h。于造模缺血2 h后和再灌注24 h后采用改良神经功能缺损评分（m NSS）法评价三组神经行为功能,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察脑梗死体积（CIV）,Western blot检测梗死区顶叶半暗带脑组织蛋白C1QTNF6、IL-1β、Occludin、ZO-1的表达水平,尼氏染色和HE染色法观察梗死区顶叶半暗带病理损伤变化,荧光TUNEL/Neu N双染法计数梗死区顶叶半暗带神经元凋亡。结果:sh RNA-C1QTNF6组术后m NSS评分（10.1±0.6分vs.10.7±1.0分,P=0.0003）与取材前（7.2±0.4分vs.7.9±0.8分,P=0.0001）均低于MCAO/R组,并且脑梗死体积比值（26.32%±5.71%vs.40.56%±7.74%,P=0.0004）也低于MCAO/R组。WB检测结果显示,MCAO/R组脑组织CQTNF6表达（0.66±0.06vs.0.43±0.05,P=0.0229）高于Sham组;sh RNA-C1QTNF6组脑组织CQTNF6表达（0.15±0.03 vs.0.43±0.05,P=0.0067;0.15±0.03 vs.0.66±0.06,P=0.0001）均低于Sham组和MCAO/R组。而MCAO/R组和sh RNA-C1QTNF6组IL-1β表达（0.76±0.07 vs.0.18±0.04,P=0.0001;0.47±0.07 vs.0.18±0.04,P=0.0118）均高于Sham组,sh RNA-C1QTNF6组IL-1β表达（0.47±0.07 vs.0.76±0.07,P=0.0123）低于MCAO/R组。MCAO/R组和sh RNA-C1QTNF6组Occludin表达（0.47±0.03vs.1.07±0.06,P=0.0001;0.84±0.05 vs.1.07±0.06,P=0.0124）和ZO-1表达（0.19±0.02vs.0.76±0.03,P=0.0001;0.58±0.04 vs.0.76±0.03,P=0.0038）均低于Sham组,sh RNA-C1QTNF6组Occludin表达（0.84±0.05 vs.0.47±0.03,P=0.0003）和ZO-1表达（0.58±0.04 vs.0.19±0.02,P=0.0001）均高于MCAO/R组。尼氏染色显示,sh RNA-C1QTN6组缺血区尼氏小体数量（361.4±18.3 vs.181.6±21.5,P=0.0001）较MCAO/R组增多,神经元损伤程度更轻。苏木精-伊红染色显示,sh RNAC1QTN6组缺血半暗带顶叶皮层病理损伤程度较MCAO/R组有所改善。Tunel/Neun双染法显示,sh RNA-C1QTN6组（19.67±0.88 vs.45±2.89,P=0.0002）Tunel/Neu N双阳性细胞数量比MCAO/R组减少,神经元凋亡数量减少。结论:抑制大鼠C1QTNF6水平可能通过下调IL-1β的表达,促进内皮细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达上升,减轻脑微血管内皮紧密连蛋白损伤,发挥对脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用。
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