【摘 要】
：
目的:探究NF-κB,MAPK,Akt信号通路与p75NTR-ICD迁入细胞核的关系及对p75NTR-ICD入核机制的初探。方法:用完全培养基贴壁培养食管癌Eca109细胞(p75NTR浆阳性细胞),用加入B-27添加剂的无血清基础培养基悬浮培养Eca109细胞,富集细胞球,收集体积大且形态圆的第1代细胞球进行传代培养,直至培养到第5代细胞球(p75NTR核阳性细胞球细胞),所有实验均是对比分析E
论文部分内容阅读
目的:探究NF-κB,MAPK,Akt信号通路与p75NTR-ICD迁入细胞核的关系及对p75NTR-ICD入核机制的初探。方法:用完全培养基贴壁培养食管癌Eca109细胞(p75NTR浆阳性细胞),用加入B-27添加剂的无血清基础培养基悬浮培养Eca109细胞,富集细胞球,收集体积大且形态圆的第1代细胞球进行传代培养,直至培养到第5代细胞球(p75NTR核阳性细胞球细胞),所有实验均是对比分析Eca109细胞和第5代细胞球的特点;采用细胞免疫荧光技术,检测p65/NF-κB,Akt和MAPK信号通路亚族ERK、JNK、p38蛋白,以及对应的磷酸化蛋白p-p65,p-AKT,p-ERK,p-JNK和p-p38在两组细胞中的表达定位;采用蛋白免疫印迹（Western blot）技术,检测p65/NF-κB,ERK/MAPK,JNK/MAPK,p38/MAPK和AKT蛋白及对应的磷酸化蛋白在两组细胞中的表达水平;免疫沉淀（IP）获取Eca109细胞和第5代细胞球中与p75NTR-ICD（又称NGFR）结合的目标蛋白;免疫沉淀串联质谱（IP-MS）鉴定两组免疫沉淀后的目标蛋白;利用KOBAS 3.0富集分析网站对质谱鉴定的目标蛋白进行蛋白注释和KEGG、GO富集分析,利用STRING数据库对筛选的结合蛋白绘制蛋白互作（PPI）网络图,利用GEPIA数据库对靶蛋白p75NTR-ICD（NGFR）和筛选的结合蛋白（RHOA、RPS27A、KRT86、FBXL22、MAGED1和TRAF6）作基因相关性分析。结果:细胞免疫荧光结果显示,p65/NF-κB,ERK/MAPK,JNK/MAPK,p38/MAPK,AKT及其磷酸化蛋白在Eca109细胞和第5代细胞球均有表达,除JNK和p-JNK荧光主要定位于细胞核外,其余蛋白及其磷酸化蛋白的荧光均广泛定位于细胞核及细胞质;Western blot结果显示,与Eca109细胞相比,第5代细胞球中p-ERK,p-p38和p-AKT的表达水平均显著增高（P＜0.05）,p-JNK表达水平降低（P＜0.05）,p-p65表达水平相同;p65,p38和AKT在Eca109细胞和第5代细胞球中的表达水平相同,ERK和JNK在第5代细胞球中的表达水平均高于Eca109细胞中的表达水平（P＜0.05）。与Eca109细胞相比,第5代细胞球中ERK,p38和AKT的磷酸化水平显著增高（P＜0.05）,JNK磷酸化水平降低（P＜0.05）,p65磷酸化水平相同。IP-MS结果显示,在两组免疫沉淀获取的目标蛋白中,未发现相同的结合蛋白。KEGG富集分析显示两组质谱分析的结合蛋白主要富集的通路也不相同;筛选的结合蛋白与p75NTR-ICD（NGFR）的基因相关性分析显示筛选的结合蛋白与p75NTR-ICD（NGFR）几乎无相关性;PPI网络图则显示p75NTR-ICD与RHOA、RPS27A、MAGED1和TRAF6相互作用。结论:p75NTR-ICD迁入细胞核的过程中ERK/MAPK、P38/MAPK、AKT信号通路被激活,JNK/MAPK信号通路被抑制;与p75NTR-ICD入核机制相关的互作蛋白可能是RHOA、RPS27A、MAGED1或TRAF6。
其他文献
＜正＞国网江苏省电力工程咨询有限公司精准领会2020年5月新出台的《江苏省电力条例》政策精神,针对建设流程合规性提升、政府对接配合、重复资料优化、信息共享机制完善等要求,提出优化输变电工程依法合规建设流程的具体措施,提升输变电工程规范管理水平。
因环境复杂，施工条件差，新建国道G106高架2号特大桥大跨度钢箱梁安装施工方案需充分考虑梁体箱梁运输可行性、现场吊装条件、施工质量可控、安全保障及减少道路封闭时长、减少支墩对现场交通影响等诸多因素。拼装施工难度大，安全风险高。最终借助于BIM技术的运用，精心设计了钢梁分段制作，现场设临时支墩，大型汽吊分段吊装拼接的施工方案。顺利完成了本项目复杂条件下大跨度钢箱梁的吊装施工，为类似环境下的钢箱梁拼装
目的:探索CA2、CA9蛋白在舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma,TSCC）中的表达、诊断及预后意义,并初步研究两者相关性及潜在机制。方法:Oncomine在线数据库分析CA2、CA9 m RNA在全身不同癌症中的表达,UCSC Xena和免疫组化实验验证CA2、CA9 m RNA和蛋白在TSCC中的表达,并研究CA2、CA9蛋白与临床因素的相关性及两者之间
“智改数转”是数字经济时代推动制造业产业集群能级提升和价值链攀升的重要手段。本文以制造业价值转型蓬勃发展之势为契机，通过对“智改数转”价值内涵的界定，将制造业价值转型归纳为由价值交易主导型向价值孪生主导型再向价值共创主导型转变的过程，而驱动两次价值转型过程的机制分别是连接机制和赋新机制，通过逐步实现资源约束突破和能力跃升来推动制造业价值转型的落地。基于此，为进一步推动“十四五”时期“智改数转”引领
目的:探讨不同的修复体穿龈轮廓对骨水平种植体周围炎发生的影响,并通过临床检查、影像学检查和生物标志物水平检测的联合诊断方法,进一步验证修复体穿龈轮廓作为种植体周围炎危险因素之一的可行性。方法:选择68例于2014年7月至2019年7月间在石河子大学医学院第一附属医院口腔科行种植修复,且负载2-5年的患者作为实验组研究对象,共包括68颗种植体。根据修复体穿龈轮廓分为凸型组25例、直型组43例,35颗
目的:优化RAW264.7巨噬细胞诱导为M1、M2亚型的方法,建立体外稳定的巨噬细胞M1、M2极化模型。通过建立M1、M2型巨噬细胞以及卡介苗刺激的RAW264.7巨噬细胞与小鼠膀胱癌细胞共培养的肿瘤微环境模型,观察共培养后小鼠膀胱癌细胞增殖迁移能力的变化。方法:第一部分:优化RAW264.7巨噬细胞诱导为M1、M2亚型的方法,建立体外稳定的巨噬细胞M1、M2极化模型。以浓度为0,50,100,2
目的:研究长链非编码RNA（lncRNA）ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法:（1）常规培养食管癌细胞株（EC109、TE）,根据病毒滴度检测最优MOI值,根据MOI值感染ANO1-AS1敲减慢病毒,沉默ANO1-AS1表达组命名为LV-sh-ANO1-AS1,阴性肿瘤对照组为LV-Con,未感染组为空白对照组Blank,感染结束后使用嘌呤霉素进行筛选,筛出稳转
为提高我国的农机化发展水平,2004年农业机械购置补贴列入中央财政优惠扶持的政策范围内,农民购买农业机械设备的积极性显著提高。随着农业科学技术的提高、农业机械装备更迭周期缩短,数量日渐充足的农业机械装备却也带来了一些问题:农业机械“只进不出”,老旧报废农机无处可去的问题十分明显。与此同时,几乎是农村户户必备的中小型拖拉机普遍存在超期使用的现象,对农民、农业发展和生态环境造成了非常大的负面影响。在这
棚户区改造一直是我国城镇保障性住房非常重要的形式之一,对推动城镇化发展具有非常重要的意义,它属于国家政府部门牵头实施的社会公共服务项目之一。尽管在棚户区改造项目的发展进程中,资金投入模式逐渐倾向于由单一的政府支持发展为以政府为主导、市场机制参与的多元化趋势,更多的倡导引入社会资本,但由于棚户区改造项目的公益特殊性和非盈利性特征,棚改项目投入的主要资金仍然是财政支出资金。因此研究财政专项资金在棚改项