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犬子宫蓄脓是由于子宫内膜增生并继发化脓性感染而引发的子宫内膜炎，又称为犬囊性子宫内膜炎—子宫积脓综合征，即由内分泌或激素受体的异常导致犬发生子宫内膜囊性增生，在此基础上有微生物介入并大量繁殖造成化脓性感染，是中老龄母犬常见的生殖系统疾病之一。细菌感染是本病发生的重要因素，人们已从患犬子宫中分离出多种细菌，包括链球菌（Streptococcus）、沙门氏菌（Salmonella）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli）等，建立其多重PCR反应快速检测方法，对该病的分子生物学技术研究具有重要意义。本实验根据链球菌EF-Tu（Elongation Factor Tu）基因、沙门氏菌invA（invasion proteinA）基因、金黄色葡萄球菌nuc（thermostable nuclease）基因和大肠杆菌phoA（Alkalinephosphatase）基因序列，设计并合成了4对引物，通过特异性检测，依次扩增出了166bp、284bp、406bp和555bp大小的目的DNA片段。对该多重PCR反应条件进行了优化，结果得到最佳退火温度为54℃，最佳引物浓度依次为100nmol/L、300nmol/L、400nmol/L和60nmol/L，最佳Mg2+浓度为1.5mmol/L。同时对该反应体系进行了敏感性测定，结果4种细菌的DNA最低检出限度依次为16.5pg/μl、3.11pg/μl、21.0pg/μl和3.52pg/μl。通过对所收集的9份犬子宫蓄脓病料进行多重PCR快速检测，结果4种细菌的检出率依次为88.9%、55.6%、11.1%和33.3%，混合感染占到了2/3。该多重PCR体系成功地从病料中检测出了链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，为今后人们在该病的微生物研究方面提供了新的思路，同时也为探讨本病的细菌分布、发病规律等提供一定的数据依据。本实验通过建立溶菌酶抑菌培养基，来初步探讨溶菌酶对上述4种细菌的抑菌能力，其浓度在19.5μg/ml~10.0mg/ml的范围内按照2倍浓度梯度依次变化。结果溶菌酶抑制金黄色葡萄球菌的效果最佳，抑制沙门氏菌的能力最差，对4种细菌的最小抑菌浓度分别在0.313~0.625mg/ml、2.50~5.00mg/ml、0.0781~0.156mg/ml和0.625~1.25mg/ml之间。