【摘 要】
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NCC0415隶属弯头曲霉（Aspergillus deflectus）,经华北制药集团新药研究开发有限责任公司采集自四川古蔺黄荆老林土壤。保藏单位是中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏号是CGMCC No.9095。微生物是天然产物的重要来源,其中土壤真菌产物又占了极大比例。NCC0415作为新发现的土壤真菌,经少量发酵分离即获取了一系列新的嗜氮酮骨架化合物,说明该真菌的次级代谢产物具备挖掘价值
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NCC0415隶属弯头曲霉（Aspergillus deflectus）,经华北制药集团新药研究开发有限责任公司采集自四川古蔺黄荆老林土壤。保藏单位是中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏号是CGMCC No.9095。微生物是天然产物的重要来源,其中土壤真菌产物又占了极大比例。NCC0415作为新发现的土壤真菌,经少量发酵分离即获取了一系列新的嗜氮酮骨架化合物,说明该真菌的次级代谢产物具备挖掘价值。因此,为了进一步获取NCC0415次级代谢产物中的新骨架,本课题大量发酵该菌株,并对其乙酸乙酯提取物进行了系统的分离和纯化,进一步对所得单体化合物进行了结构鉴定和活性研究。目的:本课题以弯头曲霉NCC0415为研究目标,采用硅胶柱色谱、中压反相柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱和制备型高效液相色谱等多种色谱技术,并结合质谱分析和薄层色谱分析技术,对NCC0415的次级代谢产物进行了系统的分离纯化。对得到的单体利用一系列波谱技术进行平面结构和立体构型的鉴定,最后对分离得到的色原酮类化合物进行次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（IMPDH）酶抑制活性测试。方法:1 m L的NCC0415的种子菌液分三份,接种至含150 m L种子培养基的750 m L锥形瓶内,26℃,200 rpm摇床培养72 h。然后将种子培养基摇匀,5%（m L/g）接种量,接种至1000 g固体培养基中,共计9000 g,恒温培养14 d。将培养基和菌丝体用20 L乙酸乙酯浸泡4 d。溶剂减压回收,得到浓缩浸膏,重复浸泡三次,得到初始浸膏。将浸膏用石油醚反复冲洗,取残留固体作为分离目标。利用液质联用技术对次级代谢产物的化学成分进行快速识别,采用硅胶柱色谱、中压反相柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱和制备型高效液相色谱等多种色谱技术依次对目标固体进行分离纯化。化学单体的平面结构及立体构型解析通过1D和2DNMR,ECD与X-单晶衍射技术（SXRD）结合的方法实现。对新的化学单体进行IMPDH酶抑制活性检测。结果:通过对弯头曲霉NCC0415的乙酸乙酯提取物的系统性分离,共计得到22个化合物,其中包括17个色原酮类化合物（新化合物1-9,已知化合物10-17）和一个来源于培养基的大豆异黄酮（18）,未鉴定出结构的化合物4个（19-22）。结构鉴定结果为:新骨架色原酮衍生物aspergichromones A-G（1-7）,8-hydroxy-6-（hydroxymethyl）-2,3-dihydrocyclopenta[b]chromene-1,9-dione（8）,aspergichromone H（9）,AGI-BA（10）,variecoxanthone A（11）,methyl 8-hydroxy-6-methyl-9-oxo-9H-xanthene-1-carboxylate（12）,sydowinin A（13）,emodin（14）,sydowinin B（15）,monodictyxanthone（16）,monodictyphenone（17）和soybean isoflavone（18）。对化合物1-8进行了IMPDH酶抑制活性的筛选,结果表明化合物1,2,4-7具有显著的抑制活性,其中化合物4-7的IC50＜10μM,优于阳性对照药mycophenolic acid。结论:本课题通过合理使用多种分离技术,对弯头曲霉NCC0415进行了系统分离,共分离出22个化合物,鉴定出结构的有18个,包括17个色原酮类化合物和1个大豆异黄酮。其中新化合物9个,为1-9。在这些化合物中,1和2具有自然界首次发现的6/6/5/5/5/6型六环骨架,3具有自然界首次发现的6/6/5/6/6/6/6型七环骨架,4-7具有自然界首次发现的6/6/6/5/5/6型六环骨架。经初步筛选,1-2和4-7显示有不同程度的IMPDH酶抑制活性,其中6/6/6/5/5/6型六环骨架化合物的活性最佳。
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