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背景:乳腺癌目前已经成为全球女性发病率最高的癌症之一,其中,三阴性乳腺癌（Triple negative breasr cancer,TNBC）在多种乳腺癌亚型中,以3种特征性受体表达阴性的特点成为恶性程度最高的亚型。3种特征性受体即雌激素受体、孕激素受体及人类表皮生长因子受体。我国女性三阴性乳腺癌患者数占总体乳腺癌患者总数的10—20%。与其他乳腺癌亚型相比,TNBC是一种高度侵袭性疾病,预后差,对于内分泌治疗和靶向治疗均不敏感,其临床特征是无病生存期较短,总生存率较低,比其他亚型更早、更频繁的发生内脏或中枢神经系统的复发和转移。而且随着三阴性乳腺癌患者的年轻化,寻找新的治疗靶点至关重要。G 蛋白耦联受体 30（G protein-coupled estrogen receptor,GPR30）,又称GPER,是一类由375个氨基酸组成的7次跨膜受体,与传统的雌激素受体ERα/ERβ相比,GPR30是一种新型的雌激素受体,1997年被Carmeci等人鉴定为ER α阳性乳腺癌细胞系MCF-7中没有已知生理配体的孤儿受体。经过近些年的研究,发现GPR30的配体有17 β-雌二醇、G1、他莫昔芬、和氟维司群等。GPR30与这些配体相互作用促进多种疾病的发生和发展。例如,GPR30在乳腺、子宫、肝脏等器官中的异常表达与癌症相关疾病有关。有研究发现,在ER阳性的乳腺癌中,长期内分泌药物治疗可促进GPR30向细胞膜的移位,导致表皮生长因子受体信号通路的激活,使MAPK和AKT发生磷酸化,进而促进细胞生长和增殖。还有研究表明,GPR30与EGFR-胰岛素样生长因子受体相互作用,可导致乳腺癌细胞和乳腺癌间质成纤维细胞的增殖和迁移。在TNBC中,虽然传统雌激素受体ER α/β为阴性,但GPR30作为一种新型的雌激素受体在TNBC中尚未得到系统研究。本研究通过检测GPR30在TNBC患者组织中表达高低,分析患者临床病理特征与GPR30表达高低的关系,然后通过体外实验降低GPR30的表达研究TNBC细胞增殖、迁移和集落形成能力的变化,从而为TNBC的治疗发现新的靶点提供理论依据。目的:本研究采用免疫组织化学染色方法检测101例TNBC患者肿瘤组织GPR30表达情况,分析其表达情况与临床病理特征之间的关系;然后通过体外实验降低TNBC乳腺癌细胞MDA-MB-468中GPR30的表达,研究其增殖及克隆能力的变化,为TNBC的治疗新靶点提供研究基础。方法:1.搜集2017年1月至2020年6月间在我院就诊的乳腺癌患者,根据纳入标准和排除标准进行严格筛选,最终纳入101例。整理这101例患者的临床资料,获取其病理类型、年龄、绝经状态、脉管癌栓、肿瘤最大直径、SBR分级、是否有腋窝淋巴结转移、免疫组化指标（Calponin P63、Ki67、D2-40）等信息,获取研究人群肿瘤组织切片,运用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织切片中GPR30表达情况。2.采用Western blot和RT-qPCR法检测三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468、BT549和MDA-MB-231中GPR30蛋白和mRNA表达水平。选取GPR30高表达细胞株为工具细胞。3.采用病毒感染技术转染MDA-MB-468细胞株成功构建低表达GPR30基因的MDA-MB-468细胞株,并采用Western blot和RT-qPCR法进行验证。4.通过划痕实验、CCK-8、平板克隆实验检测各组细胞迁移、增殖及集落形成能力的改变。5.统计学方法:采用SPSS 26软件进行分析,符合正态分布的资料以均数±标准差（x±s）描述,两组间比较采用独立样本t检验,不符合正态分布以及多组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验,计数资料和等级资料以例数和构成比N（%）描述,计数资料组间比较采用卡方检验或Fisher确切概率法,等级资料组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。将单因素差异性分析有统计学意义的变量纳入多因素Logistic回归模型中进行是否GPR30高表达影响因素筛选。采用双侧检验,当P＜0.05时有统计学意义。结果:1.1、在本研究中,肿瘤最大直径、SBR分级、脉管癌栓、是否有淋巴结转移、P63是三阴性乳腺癌中GPR30表达高低的重要影响因素。而GPR30表达高低与年龄、Ki67、绝经状态、Calponin、CK5/6、D2-40等无关。1.2、SBR分级、肿瘤最大直径、脉管癌栓、是否有淋巴结转移、P63是三阴性乳腺癌中GPR30表达高低的独立影响因素。2.1、3种三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468、MDA-MB-231、BT-549通过Western blot法检测,GPR30蛋白相对表达量分别为（0.42±0.03,0.17±0.01,0.10±0.01）;得出 MDA-MB-468 细胞 GPR30 表达最高（P=0.0036）。2.2、3 种三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-468、MDA-MB-231、BT-549 通过 RT-qPCR法对2.1步骤进行验证,结果GPR30的mRNA相对表达量分别为（1.00±0.04,0.25±0.01,0.36±0.02）;得出 MDA-MB-468 细胞 GPR30 表达最高（P=0.0036）,因此将MDA-MB-468选为工具细胞。2.3、Western blot方法检测检测实验组（sh-MDA-MB-468）和对照组（NC）蛋白表达量;实验组中GPR30蛋白相对表达量低于对照组表达量（0.59±0.02比 0.99±0.01,P=0.0003）。2.4、RT-qPCR法检测实验组（sh-MDA-MB-468）和对照组（NC）mRNA表达量;实验组中GPR30 mRNA相对表达量低于对照组表达量（0.60±0.03比1.02±0.25 P=0.0451）。2.5、划痕实验检测实验组（sh-MDA-MB-468）和对照组（NC）MDA-MB-468细胞的迁移能力,其中48h实验组相对迁移面积低于对照组（50.32%±2.01%比 79.20%±3.55%P=0.0003）。2.6 CCK8增殖实验:CCK8结果显示24、48、72、96h实验组吸光度（absorbance,A）值低于对照组为（0.75±0.03 比 0.87±0.01,0.86±0.02比 1.29±0.04,1.15±0.03 比 1.94±0.12,1.35±0.09 比 2.79±0.09 P＜0.0001）。2.7平板克隆实验:敲低MDA-MB-468细胞中GPR30表达,平板克隆实验结果显示实验组细胞数低于对照组细胞数（44±5个比79±6个,P=0.0013）。结论:1、在本研究中,肿瘤最大直径、SBR分级、脉管癌栓、是否有淋巴结转移、P63是三阴性乳腺癌中GPR30表达高低的重要影响因素。而GPR30表达高低与年龄、Ki67、绝经状态、Calponin、CK5/6、D2-40 等无关。2、SBR分级、肿瘤最大直径、脉管癌栓、是否有淋巴结转移、P63是三阴性乳腺癌中GPR30表达高低的独立影响因素。3、降低GPR30表达后,MDA-MB-468细胞增殖、迁移、集落形成能力受到显著抑制。