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目的:甲状腺癌是内分泌系统最常见恶性肿瘤。甲状腺癌的组织类型包括滤泡型和滤泡旁细胞型(也称C细胞型)。滤泡型甲状腺癌可分为分化型(DTC)、未分化型(UTC)和间变性(ATC)甲状腺癌。DTC包括乳头状(PTC)、滤泡状(FTC)、Hurtle细胞甲状腺癌和低分化甲状腺癌(PDTC)。随着社会的不断发展,中国乃至世界的甲状腺癌患者发病率不断升高,甲状腺癌已成为严重威胁人类生命健康的一种疾病。研究调控甲状腺癌恶性生物学行为的相关基因将有利于揭示甲状腺癌的发病机制。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)是一类RNA转录物,长度大于200 bp,与m RNA相比具有更高的时空特异性和较低的种间保守性。大多数lnc RNAs位于细胞核中,但也有一些lnc RNAs在细胞质中也起作用。LncRNA过去被认为是一种没有生物学功能和蛋白质编码能力的“垃圾”产物。然而,目前越来越多的研究表明lnc RNAs参与多种疾病的发病过程。有研究指出,lnc RNA在恶性肿瘤的肿瘤生成、血管生成、增殖、迁移、凋亡和分化中均发挥重要作用。迄今为止,已鉴定出大量与肿瘤相关的lnc RNA,并证明它们在肿瘤发生中起关键作用。因此,深入研究lnc RNA影响肿瘤发生发展的机制具有重要的意义。LncRNA H19位于11号染色体上的p15位点,属于母系表达基因,其在哺乳动物的生长发育中发挥重要的作用。已经有研究表明,lnc RNA H19与多种恶性肿瘤有关,例如肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、神经母细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌及食管癌等。而关于lnc RNA H19与甲状腺癌间的关系,目前的研究较少。LncRNA H19可以抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖能力,其在肿瘤细胞凋亡过程中扮演着十分重要的作用。本研究检测了分化型甲状腺癌组织中lnc RNA H19的表达水平,分析lnc RNA H19与分化型甲状腺癌患者临床病理学参数间的关系。利用MTT实验及流式细胞术,观察lnc RNA H19对分化型甲状腺癌细胞增殖及凋亡的影响。并利用RT-q PCR及Western blot实验观察lnc RNA H19与凋亡相关蛋白及PI3K/AKT信号通路间的关系,为进一步阐明lnc RNA H19对分化型甲状腺癌恶性生物学特征影响的作用机制,及寻找分化型甲状腺癌治疗的新靶点提供实验依据。方法:1.分化型甲状腺癌及其癌旁组织中lnc RNA H19表达水平检测利用实时荧光定量PCR方法检测分化型甲状腺癌组织及癌旁组织中lnc RNA H19的表达水平。2.LncRNA H19对分化型甲状腺癌细胞增殖及凋亡的影响分化型甲状腺癌细胞系FTC-133细胞和TPC-1细胞中通过转染lnc RNA H19 si RNA敲低lnc RNA H19,利用实时荧光定量PCR检测细胞转染效率。利用MTT法检测lnc RNA H19对分化型甲状腺癌细胞增殖的影响;运用流式细胞术观察lnc RNA H19对分化型甲状腺癌细胞凋亡的影响。3.LncRNA H19对分化型甲状腺癌细胞凋亡影响的分子机制研究实时荧光定量PCR方法检测敲低lnc RNA H19对分化型甲状腺癌FTC-133和TPC-1细胞中凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspase-3 m RNA表达的影响;利用Western blot实验检测敲低lnc RNA H19观察其对分化型甲状腺癌FTC-133和TPC-1细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响。利用Western blot实验观察敲低lnc RNA H19对PI3K/AKT信号通路中p-PI3K及p-AKT蛋白表达的影响。结果:1.LncRNA H19在分化型甲状腺癌组织中表达明显增高。2.敲低lnc RNA H19能够抑制分化型甲状腺癌细胞的增殖能力,并能够促进分化型甲状腺癌细胞发生凋亡。3.敲低lnc RNA H19能够使分化型甲状腺癌FTC-133和TPC-1细胞中Bax和Caspase-3 m RNA及蛋白的表达增加,并能够抑制Bcl-2 m RNA及蛋白的表达。4.分化型甲状腺癌细胞中敲低lnc RNA H19能够明显抑制p-PI3K和p-AKT的表达,表明lnc RNA H19能够通过PI3K/AKT信号通路影响分化型甲状腺癌细胞凋亡水平。结论:LncRNA H19在分化型甲状腺癌组织中表达明显增高,其可通过影响PI3K/AKT信号通路影响分化型甲状腺癌细胞的增殖能力及凋亡水平。