蜂胶黄酮的提取纯化及生物学活性研究

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蜂胶(Propolis)是工蜂采集植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶粘性物质。研究表明,蜂胶具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤、辅助降血糖和降血脂等药理学作用,而具广泛生物学活性的黄酮类化合物是中国蜂胶中含量最高、种类最为丰富的一大类化合物。  蜂胶的生物学活性是由其多种化学成分相互作用的结果。然而,蜂胶的化学成分过于复杂,且受植物来源、蜂种等因素影响,这给蜂胶中功能因子的分离纯化及研究应用带来较大困难。目前,关于蜂胶中功能因子的分离提取研究较少,且在蜂胶的研究与开发中,存在着加工方法陈旧,功能因子不明确等问题。  基于以上背景,本研究以中国蜂胶(毛胶)为原料,对蜂胶黄酮的提取纯化、成分组成、生物学活性(抗氧化、抑菌、抗肿瘤)进行了较系统的研究,主要研究结果如下:  1.采用超声波辅助提取法提取制得蜂胶浸膏,当料液比为1∶10,超声45min,95%乙醇提取3次时,总黄酮含量从毛胶中的9.41%提高到24.76%;再用硅胶柱层析法纯化得到蜂胶黄酮提取物,总黄酮含量达到35.02%,在此条件下,平均提取率为41.55%。经高效液相色谱分析,蜂胶黄酮提取物中含量最高的5种黄酮单体依次为短叶松素、松属素、短叶松素-3-乙酸酯、白杨素和高良姜素。  2.运用DPPH、ABTS自由基清除法和还原能力实验,研究了蜂胶黄酮提取物的抗氧化能力。与蜂胶浸膏及Ve、BHT等对照相比,蜂胶黄酮表现出一定的体外抗氧化能力,并在统计学上达到显著水平。  3.采用滤纸片扩散法和牛津杯法,以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为受试菌种,测定了蜂胶黄酮提取物和蜂胶浸膏的抑菌圈,发现两者均对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,且蜂胶黄酮提取物的抑菌效果优于蜂胶浸膏,而对大肠杆菌均未体现出抑制作用。  4.采用CCK-8法检测蜂胶黄酮提取物对HepG2细胞系的增殖影响,结果表明,蜂胶黄酮提取物能有效抑制HepG2细胞的增殖,具有一定的抗肿瘤效果。此外,通过细胞凋亡检测,表明蜂胶黄酮提取物能有效诱导HepG2细胞的凋亡。  总之,蜂胶毛胶经过分离纯化后总黄酮含量得到较大提升,各黄酮单体也得到不同程度的富集,且蜂胶黄酮提取物具有一定的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性。本研究为蜂胶中黄酮类化合物的分离纯化及开发利用提供了理论参考。
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