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目的:随着近年来对MicroRNA研究的深入,发现其广泛参与细胞的增殖、凋亡和分化等过程,在细胞的病理及生理变化过程中发挥重要的作用。胆管癌是起源于胆管上皮细胞具有高度侵袭性的胆道恶性肿瘤,其发病率和死亡率在全球范围内呈上升趋势。本课题将探讨MicroRNA-133(miR-133)及其不同成熟体在胆管癌细胞系中的表达,并通过特异性miRNA干扰试剂(Anti-miR-133)阻断胆管癌QBC939细胞系中内源性miR-133的表达,而后研究miR-133基因表达在胆管癌细胞迁移和侵袭过程中的作用,并初步探讨可能存在的调控机制。方法:将胆管癌QBC939细胞系接种于含10%胎牛血清DMEM培养液中培养,利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术进行总RNA抽提,逆转录获取cDNA,并测定分析miR-133及其不同成熟体(miR-133b、miR-133a-3p、miR-133a-5p)在胆管癌QBC939细胞系中的表达。采用单因素方差分析比较其不同成熟体的表达,根据RT-PCR检测结果,选择其中表达量最高的成熟体进行后期的干扰实验。选择特异性miRNA干扰试剂(Anti-miR-133)阻断胆管癌QBC939细胞系中内源性miR-133的表达,并将胆管癌QBC939细胞系经转染后分为三组:自然生长组(空白对照组),细胞转染无关序列组(阴性对照组)以及细胞转染Anti-miR-133组(干扰组),再次利用RT-PCR检测各组胆管癌QBC939细胞系中miR-133及c-Met基因的表达,采用单因素方差分析比较在三组中miR-133及c-Met基因的表达差异是否具有统计学意义。最后利用Transwell小室法分别检测分析干扰miR-133基因表达对胆管癌QBC939细胞系迁移和侵袭能力的影响。结果:使用RT-PCR检测miR-133不同成熟体miR-133b(0.74±0.07)、miR-133a-3p(0.99±0.12)、miR-133a-5p(1.00±0.06)在胆管癌QBC939细胞系中的表达,其中miR-133a-5p在胆管癌QBC939细胞系中表达量最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。利用miR-133a-5p进行后期实验,细胞转染分组后,RT-PCR实验检测干扰组胆管癌QBC939细胞系中miR-133a-5p表达量为(0.70±0.08),对照组胆管癌QBC939细胞系中miR-133a-5p表达量为(1.43±0.34),干扰组显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);同样,干扰组胆管癌QBC939细胞系中c-Met表达量为(0.09±0.02),对照组胆管癌QBC939细胞系中c-Met表达量为(1.01±0.07),干扰组显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。Transwell小室实验证实,在迁移实验中干扰组胆管癌QBC939细胞系穿过小室膜的细胞数为(69.5±8.3),在侵袭实验中干扰组胆管癌QBC939细胞系穿过铺有Matrigel胶小室膜的细胞数为(19.3±3.3),干扰组迁移和侵袭能力均明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:在体外MicroRNA-133的低表达可以明显减弱c-Met基因的表达,同时可以抑制胆管癌QBC939细胞系的迁移和侵袭能力,miR-133在胆管癌中可能具有潜在癌基因作用,并通过对肿瘤相关基因c-Met进行调控,从而影响肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,miR-133有可能成为胆管癌基因表达调控的新靶点。