【摘 要】
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鸡爪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fries]是我国长白山区特有的猪苓种质资源,具有一定的药用价值。鸡爪苓的生活史经历菌丝体-菌核-子实体3个重要时期。本论文研究鸡爪苓菌
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鸡爪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fries]是我国长白山区特有的猪苓种质资源,具有一定的药用价值。鸡爪苓的生活史经历菌丝体-菌核-子实体3个重要时期。本论文研究鸡爪苓菌核表达序列标签(EST),为深入研究该珍稀药用真菌的生长发育、代谢调控以及优质种质资源的开发、利用与保护提供理论基础。以采自吉林省蛟河市天南乡解放村的鸡爪苓菌核为原始材料,通过Trizol改良法提取总 RNA,产量为 6.24μg;SMARTTM cDNA Library Construction Kit试剂盒构建cDNA文库,原始文库的滴度3.4×106pfu/mL,重组率为93.68%,扩增文库滴度为1.304×1010pfu/mL,文库容量约为3.13×1012pfu;随机筛选500个单独克隆进行单方向测序,获得455条有效的EST序列,经聚类分析得到单基因簇共349条,文库冗余度为23%;参照拟南芥功能分类标准,将BLAST x比对结果中具有已知功能的78条单基因簇分成9类,分别是代谢、能量、转录、蛋白质合成、细胞结构、胞内运输、信号转导、抗性防御及未确定分类;仅有183条获得1条或1条以上GO术语,其中细胞组分包括7个部分,分子功能包括5个部分,生物学过程包括16个部分;发现12条全长的ESTs序列,均含有开放阅读框和蛋白质保守结构域,预测其编码的蛋白质并进行生物学信息分析。结果表明,成功提取鸡爪苓菌核总RNA,并构建了高质量cDNA文库,EST测序分析鸡爪苓菌核形成及发育过程中的功能基因,并为目的基因的特异性克隆奠定理论基础。
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