论文部分内容阅读
目的 初步探讨核转录因子-κB（NF-κB）／一氧化氮（NO）通路在大鼠肝纤维化形成过程中所起的作用，同时对褪黑素（MT）保护四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝损伤的时效关系及其保护机制进行初步研究。 方法 将99只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）对照组和MT给药组。用CCl4制造大鼠慢性肝损伤模型，同时予MT(5mg·kg-1)、NAC(100mg·kg-1)腹腔注射。在造模的第1、2、3月末处死大鼠，分别测定大鼠体重、肝脏湿重和血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和白蛋白水平及白球比值的变化；分别采用高效液相色谱法和Griess法检测大鼠血清和肝脏匀浆中NO的含量，并作肝脏炎症和纤维化指数评分，同时用免疫组化法观察肝脏NF-κB亚单位P65、P50及iNOS、α-SMA的表达。 结果 模型组大鼠血清ALT、AST水平和肝脏病理学评分显著高于正常对照大鼠，NF-κB P65、NF-κB P50、α-SMA表达明显强于正常组（P＜0.01）。在第1月末，肝脏枯否氏细胞（KC）中强烈表达NF-κB，第3月末则在肝星状细胞（HSC）中强烈表达。相关分析表明，大鼠肝脏α-SMA在第3月末的表达与NF-κB P50、P65呈显著正相关（r=0.884，p=0.08；r=0.73，p=0.062）。用NAC抑制肝脏NF-κB激活，大鼠肝功能、肝脏病理损伤显著改善，肝脏α-SMA表达也随之降低。 MT明显抑制了肝脏NF-κB P65、NF-κB P50的表达，降低转氨酶水平，提高白蛋白含量和白球比值，肝脏α-SMA的表达也显著下降。同时，肝脏病理损伤征象得到改善，在第1月末以改善肝脏炎症为主，在第2、3月末以改善肝脏纤维化为主。 同期实验结果亦表明，模型组大鼠肝脏表达iNOS显著强于正常对照组，血清和肝脏匀浆中NO含量也明显增高，且在各时间点上iNOS的表达与肝脏匀浆中NO安徽医科大学硕士学位论文含量均呈显著正相关（r=0.875，P=0.023;r=0.865，P=0.026:二0.752，P=0.08）。MT和NAC在抑制NF一妞激活的同时，可使肝脏iNOS表达减少，显著降低了肝脏匀浆中NO含量，但血清中NO含量无显著下降。结论（1）在肝纤维化形成过程的早期炎症阶段，NF一出主要调节KC释放炎症介质，具有重要的促炎作用;在纤维化阶段，则NF一沼主要调控HSC的活性，具有促纤维化作用。（2）在CC14诱导的大鼠慢性肝损伤早期，MT可以抑制枯否氏细胞的NF一沼激活，减少炎性细胞因子的表达，发挥抗炎作用，在慢性肝损伤中晚期，MT抑制HSC中NF一妞激活，抑制了其表型转变，起着减轻或延迟肝纤维化的作用。 （3）由iNOS催化产生NO的过程受NF一沼调控，主要参与肝脏炎症反应;MT抑制NF一已激活，减少了肝脏iNOS的表达，N0生成受抑制，改善了肝脏炎症反应。