背景:炎症是导致脑出血(Intracerebral haemorrhage,ICH)后继发性脑损伤的重要因素。NLRP6是Nod样受体家族的成员,参与多种疾病的炎症和宿主防御。与其他Nod样受体家族成员不同,NLRP6通过依赖炎症小体途径和非依赖炎症小体途径调节炎症。探讨NLRP6在ICH中的作用及其机制对ICH的防治以及深入认识NLRP6在不同疾病模型中的功能具有重要的价值。目的:探讨NLRP6在大鼠ICH后炎症损伤中的作用及其与ICH诱导的自噬之间的关系,并探讨NLRP6在ICH中发挥作用是否依赖炎症小体。方法:采用自体血输注基底节法建立大鼠ICH模型,采用qRT-PCR、western blot测定大鼠ICH后3h、6h、12h、24h、48h和72h脑组织内NLRP6的mRNA及蛋白表达水平。侧脑室注射siRNA并建立ICH模型,干扰大鼠脑组织内NLRP6的表达,采用改良神经损伤评分(mNSS)、脑含水量测定、H&E染色法、Nissl染色法检测干扰NLRP6对ICH大鼠脑损伤表型的影响,Evans Blue(EB)法检测血脑屏障通透性;采用荧光染色法检测髓过氧化物酶(MPO)、western blot法检测NF-κB、TNFα、白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-18、cleaved caspase-1等炎症因子的表达水平;采用western blot法检测LC3B、SQSTM1和Beclin1、透射电镜观察自噬小体的形成来评估NLRP6敲低对ICH大鼠脑组织内自噬的影响。大鼠侧脑室注射腺相关病毒(AAV)并建立ICH模型,使大鼠脑组织内NLRP6表达增加,同时腹腔注射3-MA抑制自噬的活性,采用western blot法检测NF-κB、TNFα、IL-1β、IL-18、cleaved caspase-1等炎症因子的表达水平。免疫共沉淀(co-IP)检测ICH大鼠脑组织内NLRP6与凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的相互作用,过表达NLRP6同时侧脑室注射Ac-YVAD-CMK抑制caspase-1的激活,采用western blot法检测LC3B、SQSTM1和Beclin1、NF-κB、TNFα、IL-1β、IL-18来评估自噬和炎症水平。结果:1.大鼠ICH后6h,NLRP6 mRNA和蛋白在脑组织中表达明显上调,NLRP6 mRNA在24h到达峰值,NLRP6蛋白在48h到达峰值;2.干扰NLRP6可显著降低大鼠ICH后神经损伤评分,减少脑含水量,减轻神经元变性坏死、BBB损伤和中性粒细胞浸润,降低NF-κB、TNF-α、cleaved caspase-1、IL-18、IL-1β的表达水平;3.大鼠ICH后脑组织Beclin1的表达增加,LC3II/I比值增高,SQSTM1的表达降低,自噬小体形成增加,干扰NLRP6可下调Beclin1的表达,降低LC3II/I比值,增加SQSTM1的表达,减少自噬小体的形成。AAV过表达NLRP6可增加ICH大鼠脑组织NF-κB、TNFα、cleaved caspase-1、IL-18和IL-1β等炎症因子的表达,而给予3-MA抑制自噬可逆转AAV的这一效应;4.ICH大鼠脑组织内NLRP6与ASC存在相互作用。抑制caspase-1的激活可逆转AAV过表达NLRP6引起的ICH大鼠脑组织中炎症和自噬的升高,表现为NF-κB、TNF-α、IL-18、IL-1β等炎症因子、自噬标志蛋白Beclin1、自噬底物SQSTM1的表达水平以及LC3II/I的比值的逆转。结论:NLRP6通过依赖炎症小体的方式促进自噬活性升高,从而加重ICH大鼠脑组织的炎症损伤。