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目的:1.建立与细胞因子干扰素-α(IFN-α)活化的供体淋巴细胞输注(aDLI)相对应的IFN-树突状细胞(IFN-DC)以及传统的白介素-4-DC(IL-4-DC)两组DC体外培养体系;2.比较分析两个DC培养体系中DC生物学特征以及功能差异;3.初步阐明aDLI中IFN-α诱导产生的IFN-DC与aDLI抗白血病效应增强之间的相关性。方法:1、两组体外DC(即IFN-DC与IL-4-DC)的培养:采集正常供体粒系-细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的外周血干细胞(PBSC),Ficoll法分离获得外周血单个核细胞(PBMC)。磁珠分选获得CD14+单核细胞,根据不同培养体系分成两组:对照组(IL-4-DC组):粒系巨核系-细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合白介素-4(IL-4)诱导CD14+单核细胞分化成DC,诱导第5天加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α)促进DC的成熟,并于第7天收获IL-4-DC;实验组(IFN-DC组):GM-CSF联合IFN-α诱导CD14+单核细胞分化成DC,并于第3天收获IFN-DC。2、比较两组DC的生物学特征:通过流式FCM检测两组DC免疫表型(CD14, CD83, CD56, CD11c,CD123, CD209, CD40, CD80, CD86, HLA-DR);混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC刺激淋巴细胞增殖能力;Real Time RT-PCR检测两组DC溶酶相关性膜蛋白(DCLAMP)mRNA的表达情况;采用transwell小室法测定两组DC的迁移能力,Real Time RT-PCR检测趋化因子受体CCR7mRNA水平。3、IFN-DC的功能研究:a. IFN-DC的直接细胞杀伤效应:将K562细胞与IFN-DC混合培养后,采用LDH释放试验,测IFN-DC的直接细胞杀伤率%;b. IFN-DC激活淋巴细胞引发的特异性的细胞杀伤效应:制备SHI-1细胞株冻融抗原并负载两组培养体系DC,用抗原负载DC刺激供体T细胞,再与SHI-1细胞株混合培养,采用LDH释放试验,测T细胞的细胞杀伤率%。结果:1.经GM-CSF/IFN-α以及GM-CSF/IL-4/TNF-α诱导分化的DC具有明显的细胞突起,具备典型DC形态;2.初步流式结果显示IFN-DC以及IL-4-DC较诱导前CD14表达量迅速下调,同时表达较高CD83,CD11c,CD123,CD209,CD40,CD80,CD86,HLA-DR;3. IFN-DC与IL-4-DC是两组不同的DC,二者免疫表型存在差异:CD14(81.55±1.23%vs6.80±1.80%,p=0.000),CD209(44.08±5.02%vs95.02±5.76%,p=0.002), CD40(94.29±3.69%vs70.53±2.43%, p=0.001), CD80(30.67±3.82%vs83.38±12.71%,p=0.005),CD86(85.34±5.25%vs70.16±8.25%,p=0.023);4. Transwell小室实验结果表明,IFN-DC较IL-4-DC的趋化能力更强,迁移指数(3.55±0.45) vs(2.53±0.18),p<0.05,进一步Real Time RT-PCR结果表明IFN-DC的CCR7mRNA表达量较IL-4-DC高,p<0.05;5. Real Time RT-PCR结果表明IFN-DC的DC-LAMPmRNA表达量也较IL-4-DC高,p<0.05;6.混合淋巴反应(MLR)实验结果表明在各比例条件下IFN-DC刺激淋巴细胞增殖的能力较IL-4-DC刺激淋巴细胞增殖的能力有增强趋势;7.乳酸脱氢酶释放试验表明两组DC负载冻融抗原刺激自体淋巴细胞后均有明显的细胞杀伤效应。结论:1.成功建立了IFN-DC以及IL-4-DC两个体外DC培养体系;2. IFN-DC与IL-4-DC是两组不同群体的DC;3. IFN-DC较IL-4-DC有更强的迁移能力以及抗原提呈能力;4.各比例条件下IFN-DC刺激淋巴细胞增殖的能力较IL-4-DC刺激淋巴细胞增殖的能力有增强趋势,同时抗原负载的IFN-DC可激活T细胞引发特异性的细胞杀伤效应;5. aDLI产生强大的GVL效应部分是IFN-DC参与的结果。