【摘 要】
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目的:血管内皮细胞的损伤和氧化应激是心血管疾病发生的基础病变,利用过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）作用于人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）建立氧化应激损伤模型。采用染料木黄酮（Genistein,GEN）作为抗氧化药物,探讨GEN对细胞氧化应激损伤及凋亡的调控作用,为GEN预防氧化应激损伤的研究奠定基
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目的:血管内皮细胞的损伤和氧化应激是心血管疾病发生的基础病变,利用过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）作用于人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）建立氧化应激损伤模型。采用染料木黄酮（Genistein,GEN）作为抗氧化药物,探讨GEN对细胞氧化应激损伤及凋亡的调控作用,为GEN预防氧化应激损伤的研究奠定基础,为GEN的临床应用提供实验依据。方法:经前期实验条件摸索,用CCK-8法测定细胞存活率,确定10μmol/L GEN预处理1 h、130μmol/L H2O2处理1 h作为后续实验的条件。将细胞分为四组,分别为对照组、GEN处理组、GEN+H2O2处理组、H2O2处理组。采用流式细胞术测定不同处理组细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和细胞凋亡情况。利用酶活性检测试剂盒分别测定总谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GPx）活力、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量。利用q PCR法测定细胞内Nrf2、Ho-1、Sod1、Bax、Bcl-2、Caspase-3等m RNA的表达情况,用Western Blot法测定上述蛋白的表达情况。应用Graph Pad Prism 8.0进行统计分析,多组间比较采用方差分析,用Bonferroni方法进行校正。两组间比较采用两独立样本t检验,P＜0.05时认为差异有统计学意义。结果:与H2O2单独处理组相比,GEN+H2O2组细胞内ROS明显降低（P＜0.05）;早期凋亡率明显降低（P＜0.05）,晚期凋亡率无明显变化（P＞0.05）;GPx活力、SOD酶活性、GSH酶活性均提高（P＜0.05）。q PCR结果表明,与H2O2单独处理组相比,GEN+H2O2组Nrf2、Ho-1、Sod1的m RNA表达量增高（P＜0.01）,Bax/Bcl-2的比值降低（P＜0.01）、Caspase-3的表达量降低（P＜0.001）。Western Blot结果显示,与H2O2单独处理组相比,GEN+H2O2组NRF2、HO-1、SOD1的蛋白表达量增加（P＜0.05）,BAX/BCL-2的比值及CASPASE-3表达降低（P＜0.01）。结论:1.GEN能够改善H2O2对HUVEC所造成的细胞活力的下降。2.GEN能减轻H2O2引起的HUVEC细胞内ROS的聚集。3.GEN能降低H2O2处理对HUVEC所造成细胞的早期凋亡率、总凋亡率的升高。4.GEN可以提高H2O2导致的HUVEC细胞内抗氧化酶的表达降低。5.GEN可能通过调控NRF2/HO-1信号通路保护HUVEC免受H2O2所造成的血管内皮损伤。
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