马铃薯Y病毒科（Potyviridae）是第一大植物RNA病毒科,该科病毒可危害多种重要的经济作物和粮食作物。课题组前期从海南槟榔中鉴定到了两种近缘Potyviridae病毒新种,分别为槟榔坏死梭斑病毒（areca palm necrotic spindle-spot virus,ANSSV）和槟榔坏死环斑病毒（areca palm necrotic ringspot virus,ANRSV）,它们在分类上归属于一个新属-槟榔病毒属（Arepavirus）。该两种病毒流行性高,诱导严重坏死衰退等症状,严重制约槟榔产业的健康发展。但目前尚不清楚该两种病毒的生物学、病理特性、两病毒间的相互作用、病毒侵染关键位点等重要科学问题。本研究主要围绕ANRSV侵染性克隆的构建、ANSSV与ANRSV的病理特性、基因组区段的功能兼容性和两病毒间的相互作用及ANSSV侵染关键位点展开研究,并取得如下结果:1.构建了ANRSV的全长c DNA克隆（p RS）,该病毒克隆在实验寄主本氏烟中具有侵染活性,随后在p RS病毒基因组NIb/CP处插入了绿色荧光蛋白（GFP）序列获得了GFP标记的病毒克隆p RS-G,该克隆在本氏烟中同样具有侵染活性。2.两种病毒的病理特性研究表明:与ANSSV相比,ANRSV诱导更严重的叶片褪绿和皱缩症状,且致病性差异与病毒积累速率呈正相关。3.ANRSV和ANSSV基因组区段功能兼容性研究结果表明:以ANRSV为骨架,将ANSSV不同基因组区段置换ANRSV中对应区域构建了一系列杂合病毒,侵染性测定结果表明:置换5′-UTR-HCPro1-HCPro2和CI区域病毒可高效增殖和系统侵染,然而置换P3-7K,9K-NIa或NIb-CP-3′-UTR废除了病毒的侵染活性。4.两种近缘病毒间相互作用研究结果表明:共侵染和超侵染实验证实ANSSV与ANRSV之间存在拮抗互作关系,且ANRSV能够有效排阻ANSSV的侵染,揭示了两种病毒田间流行学差异的分子基础。5.ANSSV侵染关键位点鉴定:在本研究中,我们鉴定到了ANSSV子代病毒基因组中发生了三个氨基酸位点突变,进一步通过构建点突变体（包括单氨基酸,双氨基酸,三氨基酸突变体）,侵染性测定发现分别位于病毒复制相关蛋白（P3和NIb）中两个氨基酸位点（I883M和E2704G）的突变显著增强了病毒的侵染性。该研究结果为进一步解析病毒侵染性的分子机理奠定了重要基础。综上所述,在本研究中我们成功建立了ANRSV的反向遗传学体系,探究了该两种病毒病理特性、基因组区段功能的兼容性及两者间的拮抗互作关系,该研究结果促进了我们对两病毒的生物学和分子特性的理解。此外,我们鉴定到了ANSSV位于病毒复制相关蛋白的两个氨基酸位点对病毒的侵染至关重要,为进一步揭示其背后的分子机制奠定了重要基础。