【摘 要】
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肿瘤严重威胁着人类的生命健康,目前用药主要以化学药物为主,而植物多糖近年来在癌症治疗领域凸显出一些优势。羊角天麻是漆树科（Anacardiaceae）九子母属（Dobinea）多年生亚灌木状草本,拥有较长的民间用药历史,具有消炎止痛、舒筋活络之功效。课题组前期研究发现羊角天麻多糖具有明显的抗肿瘤活性。因此,本研究以羊角天麻多糖为研究对象,通过体外抗癌实验,探讨了不同醇沉部位羊角天麻多糖对人肝癌He
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肿瘤严重威胁着人类的生命健康,目前用药主要以化学药物为主,而植物多糖近年来在癌症治疗领域凸显出一些优势。羊角天麻是漆树科（Anacardiaceae）九子母属（Dobinea）多年生亚灌木状草本,拥有较长的民间用药历史,具有消炎止痛、舒筋活络之功效。课题组前期研究发现羊角天麻多糖具有明显的抗肿瘤活性。因此,本研究以羊角天麻多糖为研究对象,通过体外抗癌实验,探讨了不同醇沉部位羊角天麻多糖对人肝癌Hep G2细胞和小鼠胃癌MFC细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;并结合转录组学探究其影响Hep G2细胞增殖和凋亡的分子机制,为民族药羊角天麻药用潜力的挖掘提供理论基础。本研究主要得出以下结果:（1）本研究采用分级醇沉法提取了羊角天麻30%、60%和95%醇沉多糖,分别命名为DDP-1、DDP-2和DDP-3;利用苯酚-硫酸法,测定了三种多糖的总糖含量分别为59.94%、35.40%和41.21%;傅里叶红外光谱法测定了三种多糖均具有多糖常见的特征吸收峰;PMP-HPLC法测定了三者的单糖组成,发现DDP-2和DDP-3均含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖5种单糖,摩尔比分别为1.00:0.70:2.70:2.73:0.31和1.00:0.83:1.93:2.93:0.47。DDP-1含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖4种多糖,摩尔比为1.00:8.73:0.43:0.09。（2）采用CCK-8法测定羊角天麻30%、60%、95%醇沉多糖对Hep G2细胞和MFC细胞活力的影响,发现在25～1600μg/m L浓度范围内,三种多糖均能降低两种细胞的细胞活力,其中,DDP-3的效果最好,其对这两种细胞的IC50分别为1188.16μg/m L和1167.71μg/m L。当阳性对照5-Fu浓度为100μg/m L时,Hep G2细胞和MFC细胞的存活率分别为43.87%和44.73%,可见羊角天麻多糖的抗癌活性弱于5-Fu。采用流式细胞术测定了DDP-3对Hep G2和MFC细胞周期的影响,发现DDP-3在浓度400～1600μg/m L时,可极显著阻滞Hep G2细胞的周期于S期;在800～1600μg/m L时,可显著阻滞MFC细胞的周期于G2/M期。通过流式细胞术测定了DDP-3对两种细胞凋亡的影响,发现DDP-3在800～1600μg/m L时,可极显著促进Hep G2细胞的凋亡;在400～1600μg/m L时,可极显著促进MFC细胞的凋亡。（3）基于转录组测序技术,比较了对照组与DDP-3给药组的基因差异表达情况,发现对照组与低、高剂量组的总差异表达基因数分别为1882和2333,其中上调差异基因数分别为1388和1454,下调差异基因数分别为494和879;而低剂量组与高剂量组间的总差异基因数为165,其中上、下调基因数分别为47和118。对差异表达基因进行GO富集和KEGG分析,得出羊角天麻多糖的抗肝癌活性主要与MAPK signaling pathway、P53 signaling pathway、TGF-βsignaling pathway、Apoptosis等通路有关。结合蛋白互作网络分析,筛选出5个关键基因:BCL2A1、GADD45B、MDM4、TGF-β1和MAP2K6;q RT-PCR结果表明,与对照组相比,给药组GADD45B、MAP2K6、BCL2A1的mRNA表达量有所降低,TGF-β1和MDM4的表达量有所提高。本研究通过体外试验,发现羊角天麻多糖具有明显抗肿瘤活性。初步探究了羊角天麻多糖的抗癌活性机制,发现其能通过降低Hep G2和MFC细胞的活力、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。转录组学研究表明,羊角天麻多糖通过调控MAPK和p53信号通路影响Hep G2细胞的增殖和凋亡。这为挖掘羊角天麻的药用潜力,促进其成为医药保健产品奠定理论基础。
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