【摘 要】
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目的:探究金合欢素（acacetin,ACA）在体外和体内对人骨肉瘤细胞的影响及机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞,分别给予不同浓度的ACA处理,结晶紫染色、MTT实验、克隆形成实验检测细胞增殖,FCM检测细胞周期,Hoechst染色和FCM检测细胞凋亡,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。用同样浓度的ACA处理人正常细胞,MTT实验、FCM检测细胞增殖和凋亡。WB检测相关蛋白水
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目的:探究金合欢素（acacetin,ACA）在体外和体内对人骨肉瘤细胞的影响及机制。方法:体外培养人骨肉瘤细胞,分别给予不同浓度的ACA处理,结晶紫染色、MTT实验、克隆形成实验检测细胞增殖,FCM检测细胞周期,Hoechst染色和FCM检测细胞凋亡,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。用同样浓度的ACA处理人正常细胞,MTT实验、FCM检测细胞增殖和凋亡。WB检测相关蛋白水平。用β-catenin过表达病毒（Ad R-β-catenin）和JNK抑制剂（SP600125）分别与ACA联合处理骨肉瘤细胞,观察挽救效果。构建骨肉瘤的裸鼠股骨原位成瘤模型,HE染色和IHC分析ACA在体内对骨肉瘤细胞的作用。结果:结晶紫染色、MTT实验、克隆形成实验和FCM结果表明ACA可抑制骨肉瘤细胞的增殖,并将MG63细胞阻滞在G2/M期,且增殖相关蛋白（PCNA、Cyclin D1、c-Myc）的蛋白水平下降。Hoechst染色和FCM结果表明ACA可促进骨肉瘤细胞的凋亡,且抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平下降,促凋亡蛋白（Bax、Bad）、凋亡标志蛋白（c-Caspase3、c-PARP）的蛋白水平升高。划痕愈合实验和Transwell实验结果表明ACA可抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,且MMP-2/7/9、Snail、Vimentin和N-cadherin的蛋白水平下降,E-cadherin的蛋白水平升高。同时,磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β（ser9））、β-catenin蛋白水平下降,磷酸化JNK（p-JNK）蛋白水平升高。MTT实验、FCM结果表明ACA对正常细胞的增殖、凋亡无明显影响。Ad R-β-catenin和SP600125处理后,ACA对骨肉瘤细胞的作用可部分逆转。小鼠体内骨肉瘤的恶性程度和肺转移均被ACA有效抑制,且肿瘤组织的PCNA、Bcl-2、β-catenin蛋白水平下降,E-cadherin、p-JNK蛋白水平升高。结论:ACA在体外可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,但对正常细胞的增殖、凋亡影响很小;ACA在体内可抑制骨肉瘤细胞的生长和转移。其分子机制可能与下调Wnt/β-catenin和上调JNK信号通路活性有关。
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