目的:以前期实验的载体PMT155(p LVX-TRE3G-MCS-PGK-3Gtransactivator-EGFP)构建含有DOX诱导基因PENK表达的慢病毒载体PSB2034(p LVX-TRE3G-PENK-PGK-3Gtransactivator-EGFP,含开关调控和靶基因),使其感染293T细胞,获得能在DOX存在的情况下稳定表达脑啡肽的293T细胞,后续的研究可以以此作依据,临床疼痛管理也可以此扩宽思路,寻求新疗法。方法:1.含有PENK基因的可调控载体的构建在GENE BANK上查找目的基因,确定编码区和非编码区,由吉凯基因设计引物用于钓取PENK基因和鉴定转化子。PCR反应体系进行扩增目的基因,之后使用琼胶试剂盒进行目的基因片段切割、回收。把回收的目的基因同源重组入表达载体构建出载体PSB2034,进行转化,取转化子菌落进行PCR鉴定和基因测序。2.293T细胞的包装复融并培养293T细胞使其细胞融合约80~90%。实验组和对照组加入质粒(实验组p SB2034对照组p MT155)d R8.9包装质粒和VSVG包装质粒进行慢病毒的包装,而后包装293T,并用DOX诱导,QPCR检测出PENK过表达,WB检出条带反应。结果:对产物PSB2034进行测序与目的基因比证明无误;感染过程中,用荧光显微镜观察细胞,发现多于95%的细胞都带有荧光,滴度检测证明转染成功,DOX诱导后可检测出PENK基因过表达。结论:本实验已经构建出DOX诱导后能稳定表达脑啡肽的293T细胞。