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研究背景和研究目的:近几十年来,近视的患病率逐步上升,已经成为全球特别是东亚国家中的重要公共卫生问题,在东亚地区,80%-90%的高中毕业生患有近视。近视患病率的增加将带来巨大的社会经济负担,而且高度近视的逐渐发展会导致威胁视力的眼部并发症。然而,近视的发病机制仍然未能明确,目前尚缺乏从根源上控制近视的方法。视黄酸(retinoic acid,RA)是人体内维生素A的自然衍生物。近年来的研究表明,RA作为一种重要的信号因子在视觉依赖性眼球生长中发挥作用,且在调控眼球生长的信号传导通路中处于相对上游的位置。转化生长因子β2(transfer growth factor-β2,TGF-β2)是目前研究较多、且与近视密切相关的一种生长因子,它参与调控包括I型胶原和核心蛋白聚糖在内的细胞外基质的合成和分泌。另一方面,活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)是诸多细胞信号传导途径在细胞核内的交汇点,在肿瘤学研究中,RAR通过抑制AP-1的活性发挥作用,可调控TGF-β2的表达,在近视发生过程中亦发挥重要作用。综上所述,我们提出假设:RA可能作为一级信号因子与RARβ结合,通过细胞内一系列反应影响AP-1活性,进而调控TGF-β2的表达,最终影响巩膜成纤维细胞合成胶原等细胞外基质,引起巩膜主动塑形,导致轴性近视发生。本课题目的在于研究上调视黄酸(RA)信号以及抑制活化蛋白-1(AP-1)转录活性对RPE分泌转化生长因子β2(TGF-β2)的影响以及可能的作用途径,为研究近视的发病机制和防治提供新的思路。研究方法:1.检测ATRA干预的作用,将ARPE-19细胞分为:正常对照组和6、12、24、48 h组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blot和免疫荧光检测RARβ、c-Fos和TGF-β2的表达。2.检测RARβ抑制剂LE540对ATRA诱导后细胞表达RARβ和c-Fos的影响,将ARPE-19细胞分为:正常对照组,ATRA组,LE540组和ATRA+LE540组,用RT-qPCR和Western blot检测RARβ和c-Fos的表达。3.检测AP-1抑制剂T-5224干预的作用,将ARPE-19细胞分为:正常对照组和12、24、48 h组,用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测RPE细胞中AP-1活性,将细胞分为正常对照组、LE540组、ATRA组和ATRA+T-5224组,用RT-qPCR和Western blot检测RARβ的表达。4.检测LE540和T-5224对ATRA诱导后细胞表达和分泌TGF-β2的影响,将ARPE-19细胞分为正常对照组,ATRA组,ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组,用Western blot和酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测TGF-β2的表达和分泌量。结果:1.ATRA干预24和48 h后,RARβ的表达较对照组明显升高(P<0.05),c-Fos的表达先升后降。ATRA干预6、12 h后,c-Fos表达明显升高(P<0.01),而干预48 h后,c-Fos表达下降,与对照组相比无统计学差异(P>0.05),TGF-β2表达较对照组升高(P<0.05);LE540干预48 h后,LE540组RARβ较对照组表达下降,ATRA+LE540组RARβ较ATRA组表达下降;ATRA组c-Fos表达与对照组相比无统计学差异(P>0.05),LE540组和ATRA+LE540组较ATRA组c-Fos表达升高(P<0.05)。2.T-5224干预48 h后,ATRA组和ATRA+T-5224组RARβ表达无明显差异(P>0.05),较对照组表达明显升高(P<0.05);T-5224干预24和48 h后,AP-1的转录活性明显下降(P<0.01)。用LE540和T-5224干预48 h后,ATRA组TGF-β2表达升高,ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组TGF-β2的表达较ATRA组明显下降(P<0.05)。结论:ATRA通过RARβ影响AP-1的转录活性,进而促进ARPE-19细胞分泌TGF-β2。