【摘 要】
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非达霉素（Fidaxomicin）系德干高原游动放线菌（Actinoplanes deccanensis ATCC 21983）中分离到的新型大环内酯类抗生素,能有效治疗艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection,CDI）,其疗效优于万古霉素。本论文从实验室已有菌株OE-R1/WT出发,利用启动子高表达技术构建高产菌株,并对该菌株的发酵培养基与发酵条件进行优化,进
【基金项目】
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国家重点研发计划《放线菌药物合成生物体系的网络重构与系统优化》（项目编号:2019YFA0905400）；
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非达霉素（Fidaxomicin）系德干高原游动放线菌（Actinoplanes deccanensis ATCC 21983）中分离到的新型大环内酯类抗生素,能有效治疗艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection,CDI）,其疗效优于万古霉素。本论文从实验室已有菌株OE-R1/WT出发,利用启动子高表达技术构建高产菌株,并对该菌株的发酵培养基与发酵条件进行优化,进而实现非达霉素的优质高产。首先,利用启动子工程技术,从已有的强启动子库里筛选得到本菌最适配的启动子erm E*p,应用该启动子驱动基因簇内途径特异性正调控基因fad R1进行高表达,构建得到工程菌株DOE-R1/WT的非达霉素摇瓶发酵水平达到300μg/m L,比出发菌产量提高一倍。其次,采用响应面中心组合实验和单因素筛选实验,对工程菌株DOE-R1/WT的发酵条件和发酵培养基进行系统优化,优化后培养基为葡萄糖2%、可溶性淀粉1.84%、棉籽饼粉1.75%、K2HPO40.728%、酵母粉0.5%、Na Cl 0.3%,发酵条件为接种量2%、初始p H 7.0、剪切力采用10颗Φ8玻璃珠,非达霉素摇瓶发酵水平可达600μg/m L,较优化前提高了一倍。最后,利用优化培养基在5 L和15 L发酵罐进行该工程菌株的放大培养验证试验,产量分别达到930μg/m L和670μg/m L,为后续中试放大及工业化生产提供了基础。
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