目的在研究黄芪桂枝五物汤对小鼠热板及扭体实验止痛作用的基础上,从神经递质和炎性反应两方面,研究黄芪桂枝五物汤缓解骨关节炎疼痛的机制,为黄芪桂枝五物汤对骨关节炎的止痛作用提供实验依据。方法实验一:SPF级雌性CD-1小鼠按照随机数字表法分为热板模型组和造模组。除热板模型组外,造模组进行冷水力竭游泳合低温外界刺激法造模两周,造模结束后,造模组随机分为热板寒湿证模型组和黄芪桂枝五物汤给药组,黄芪桂枝五物汤给药组以浓度5.2 g?kg^-1灌胃治疗7天,其余两组灌服同等剂量蒸馏水,末次给药后进行热板实验,分别在末次灌胃后45 min、90 min、135 min、180 min检测小鼠舔趾潜伏时间;同法造模和给药后小鼠以0.6%冰醋酸溶液进行扭体实验,检测小鼠扭体潜伏时间和扭体次数。实验二:SPF级雌性SD大鼠随机分为正常组和造模组,模型组大鼠采用冷固法联合冰水刺激、低温外界刺激、饥饱饮食的方法制备阳虚寒凝型骨关节炎模型。造模后,按照随机数字表法将模型大鼠分为模型组、黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组、塞来昔布阳性对照组,各组分别按照各自浓度(11.7 g?kg^-1,5.85 g?kg^-1,2.93 g?kg^-1,0.018 g?kg^-1)灌胃给药,每日一次连续28天（同时正常组与模型组大鼠灌服相同剂量蒸馏水）。实验期间观察各组大鼠症状表现、评定关节炎指数,定期测量各组大鼠体重、足掌温度、右膝关节宽度,计算关节肿胀度;给药后,将大鼠血清、大脑、膝骨关节、滑膜进行分离。采用ELISA法检测血清IL-1、IL-6、SP、5-HT、DA含量和匀浆后大脑COX-2、DA、NGF、5-HT、SP含量;荧光定量和蛋白印迹法PCR检测滑膜及脑组织中NGF、COX-2的基因和蛋白表达;HE染色法观察膝骨关节病理改变。结果（一）、黄芪桂枝五物汤对小鼠疼痛的防治作用（1）黄芪桂枝五物汤对小鼠热板疼痛的止痛作用研究给药后,对比各组小鼠舔脚时间,与热板模型组相比,热板寒湿证模型组小鼠舔脚时间在各时间段有所减短,且在180 min时差异有显著性（P<0.05）;给药组在各时间段有所增长,且在180 min时差异有显著性（P<0.05）;与热板寒湿证模型组相比,给药组在各时间段均有增长,且在90 min、135 min、180 min时差异有显著性（P<0.05）。（2）黄芪桂枝五物汤对小鼠醋酸扭体疼痛的止痛作用研究给药后,对比各组小鼠扭体潜伏期及扭体次数,与扭体模型组相比,给药组扭体次数显著减少（P<0.05）;与扭体寒湿证模型组相比,给药组扭体次数显著减少（P<0.05）（二）、黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝型骨关节炎大鼠的实验研究（1）与正常组大鼠比较,模型组大鼠精神萎靡不振,毛发黏连粗糙,色质暗淡,无光泽,双下肢毛发脱落严重,裸露皮肤呈现暗紫色,肢体活动不灵,明显可见肿胀增加,部分呈现溃破现象,饮食减少,大便不成型;与模型组比较,塞来昔布组及黄芪桂枝五物汤中、高剂量组大鼠,精神恢复,毛色恢复光泽,双下肢毛发生长,活动基本不受限,饮食增加,大便成形;黄芪桂枝五物汤低剂量组精神稍有转好,毛色恢复光泽,双下肢活动肿胀受限,但较模型组轻。（2）各组大鼠膝关节结构病理切片示,正常组膝关节表面平整,未见缺损,软骨细胞排列整齐,滑膜组织可见少量血管组织或血管内皮细胞;模型组膝关节软骨表面有缺损,软骨细胞层比正常组的薄,细胞数量也有所减少,有较多小血管分布,血管翳较严重;塞来昔布组软骨表面模糊,软骨细胞量较模型组多,并可见软骨细胞分裂现象;黄芪桂枝五物汤各剂量组软骨表面较平整,可见大量软骨细胞处于增殖分裂期,软骨炎性细胞分布较少,滑膜层细胞较模型组少,内仍可见小血管分布,滑膜炎性细胞分布较少。（3）与正常组大鼠比较,模型组大鼠关节炎指数呈增长趋势（P<0.05）,关节趾温升高、肿胀度增大（P>0.05）,大鼠体重减轻（P<0.05）;与模型组相比,各用药组体重增加,且塞来昔布组、黄芪桂枝五物汤低剂量组增加明显（P<0.05）,关节炎指数降低,且塞来昔布组、黄芪桂枝五物汤中剂量组趾温降低、关节肿胀度减轻（P<0.05）。（4）与正常组比较,模型组血清IL-1、IL-6、COX-2含量显著增高（P<0.05）,滑膜、脑组织中,COX-2基因、蛋白表达量显著增高（P<0.01）,各用药组与模型组相比,血清中IL-1、IL-6、COX-2含量显著降低（P<0.05）,滑膜组织中COX-2基因、蛋白表达量显著降低（P<0.05）,脑组织中,与模型组比较,阳性对照组,低、中剂量组COX-2基因、蛋白表达量降低,高剂量组COX-2显著降低（P<0.05）。（5）与正常组比较,模型组血清SP、5-TH、DA含量显著增高（P<0.05）,滑膜、脑组织中,NGF基因、蛋白表达量显著增高（P<0.01）,各用药组与模型组相比,血清中5-TH、DA含量显著降低（P<0.05）,塞来昔布组、黄芪桂枝五物汤高剂量组血清SP含量显著降低（P<0.05）;大脑匀浆检测中,与正常组比较,模型组DA、5-HT、SP、NGF含量均增高,各用药组与模型组比较,DA、5-HT、SP含量均显著降低（P<0.05）,各用药组NGF大鼠指标含量有降低趋势（P>0.05）;在滑膜组织中,与正常组相比,NGF基因、蛋白表达量显著增高（P<0.01）,各用药组与模型组相比,NGF基因、蛋白表达量显著降低（P<0.05）,脑组织中与模型组比较,塞来昔布组,低、中剂量组NGF表达量降低,高剂量组NGF表达量显著降低（P<0.05）结论（1）黄芪桂枝五物汤对寒湿模型小鼠具有良好的止痛作用,在给药后三小时内,随着时间的推移镇痛作用逐渐增强,说明在一定时间内,黄芪桂枝五物汤可以使寒湿模型小鼠疼痛得以缓解。（2）黄芪桂枝五物汤显著增加大鼠体重,降低关节炎指数、足趾趾温、膝关节肿胀度,使得关节表面平整,软骨细胞排列整齐,炎性及巨噬细胞减少,软骨下骨结构趋于完整。黄芪桂枝五物汤给药后,软骨表面较平整,软骨炎性细胞分布较少,滑膜层细胞减少,说明黄芪桂枝五物汤对治疗阳虚寒凝型大鼠骨关节炎疼痛有一定作用。（3）大鼠给药组血清检测中IL-1、IL-6、COX-2,滑膜、脑组织中COX-2基因、蛋白表达量较模型组低,说明黄芪桂枝五物汤的止痛效果与抑制炎性细胞因子有关,可以通过免疫调节作用减少炎性因子的释放,以此来缓解疼痛。（4）大鼠给药组血清检测中,SP、5-TH、DA含量较模型组低,大脑匀浆检测中,DA、5-HT、SP含量较模型组低,说明黄芪桂枝五物汤的止痛效果可以在神经疼痛递质中得以表现;但匀浆检测各用药组NGF大鼠指标含量虽有降低趋势,但差异无统计学意义,其改变可能与黄芪桂枝五物汤的给药剂量存在一定的关系,有待进一步研究;在滑膜、脑组织中,与正常组相比,模型组NGF基因、蛋白表达量显著增高（P<0.01）,与模型组相比,各用药组NGF基因、蛋白表达量显著降低（P<0.05）,说明黄芪桂枝五物汤可以减少神经疼痛细胞因子产生。