【摘 要】
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神经退行性疾病及神经损伤等神经系统类疾病严重影响人们的生活质量,给患者和社会造成了极大的负担。神经组织工程旨在恢复或增强受损组织和器官的功能,有望实现受损神经的修复和再生。其中,支架材料作为组织再生的模板,在神经再生中发挥着重要的作用。碳纳米管(Carbon nanotubes,CNTs)具有良好的生物相容性、优异的导电性和机械性能,被认为是潜在的神经组织工程支架材料。因此,本文用CNTs结合海藻
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神经退行性疾病及神经损伤等神经系统类疾病严重影响人们的生活质量,给患者和社会造成了极大的负担。神经组织工程旨在恢复或增强受损组织和器官的功能,有望实现受损神经的修复和再生。其中,支架材料作为组织再生的模板,在神经再生中发挥着重要的作用。碳纳米管(Carbon nanotubes,CNTs)具有良好的生物相容性、优异的导电性和机械性能,被认为是潜在的神经组织工程支架材料。因此,本文用CNTs结合海藻酸钠和明胶两种天然可降解生物材料,制备导电的神经组织工程支架,并在体外培养环境中结合电磁刺激,探究其协同电磁场对神经细胞体外生物学行为的影响。本研究以天然材料中的海藻酸钠(Alginate,Alg)和明胶(Gelatin,Gel)为基础,通过冷冻干燥和化学交联的方法制备了Alg/Gel支架。然后将不同含量的m MWCNTs引入到Alg/Gel支架中,得到Alg/Gel/m MWCNTs复合生物支架。并对四种复合生物支架(Alg/Gel支架、Alg/Gel-1%C支架、Alg/Gel-3%C支架、Alg/Gel-5%C支架)的物理化学性能进行考察。结果表明:所有的复合支架都具有互穿连通的孔隙结构,孔隙率大约87%-94%,孔径大约100-150μm;支架的溶胀率最低达1307±107%,并能维持结构稳定;热重分析结果显示,复合支架具有良好的热稳定性;m MWCNTs的加入增大了复合支架的表面粗造度、亲水性、机械性能和电导率。其中,当m MWCNTs含量为3%时,电导率可达1.0×10-3S/cm左右,能有效满足神经组织工程研究和治疗中的电导率需要。接下来,通过对细胞-支架复合物进行细胞粘附率测定、复合荧光染色、CCK检测、扫描电子显微镜(SEM)观察细胞形态、细胞代谢情况分析等检测系统评价了复合生物支架的生物相容性。结果表明:所有四组复合支架均具有良好的生物相容性且能支持PC12细胞的生长和增殖,同时随着m MWCNTs含量增加,复合支架的生物相容性呈现出先增大后减小的趋势。其中,Alg/Gel-1%C支架表现出最佳的生物相容性。在上述研究的基础上,对四种细胞-支架复合物施加不同磁场强度(0m T、0.1m T、1m T、2m T、3m T)的电磁刺激,连续刺激7天,每天刺激30 min。通过复合荧光染色、CCK检测、SEM等检测探究四种复合支架协同电磁场对PC12细胞的体外生物学行为的影响。其结果如下:Alg/Gel支架上的PC12细胞的细胞活性随磁场强度增大受到抑制;Alg/Gel-1%C支架和Alg/Gel-3%C支架上的PC12细胞,其活性随着磁场强度的增大呈现先增大后减小的趋势,且在1m T时细胞活性最高;Alg/Gel-5%C支架上细胞数量较少,细胞的活性随磁场变化无明显差异。此外,电磁场所施加的刺激可能促进PC12细胞神经突的生长,Alg/Gel-3%C支架在3m T作用下出现了细长的神经突起。
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