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研究目的寻找与胃癌发生相关的肿瘤标志被认为是胃癌早期诊断的关键。近年来蛋白质组学技术的发展为胃癌的研究开拓了一条新途径,本研究利用蛋白质组学方法建立人胃癌组织及癌旁组织的双向凝胶电泳图谱,筛选出差异表达的蛋白质点,经质谱鉴定,并用Western Blot技术对筛选出的胃癌相关蛋白的表达情况进行了分析。材料与方法1.用双向电泳裂解液提取胃癌组织和癌旁组织可溶性总蛋白,Bradford方法测定蛋白样品浓度,根据所测浓度决定分析型凝胶和制备型凝胶的蛋白上样量。2.制备标准参比胶,将胃癌组织和癌旁组织的可溶性总蛋白以分析型蛋白上样量进行双向电泳,所得凝胶经银染后,用PowerLook 1120蛋白图谱扫描仪扫描获取凝胶图像,ImageMaster 2D platinum6.0图像分析软件分析图像,得到胃癌组织和癌旁组织的参比凝胶中蛋白质点的匹配率。3.以制备型蛋白上样量制备胃癌组织和癌旁组织的可溶性总蛋白双向电泳凝胶,用PowerLook 1120蛋白图谱扫描仪扫描获取凝胶图像,经ImageMaster 2Dplatinum6.0图像分析软件分析及人工对比,找出凝胶上表达不同的蛋白质点。4.在制备凝胶上挖取表达不同的蛋白质点,经胶内酶解后,由基质辅助电离解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),通过生物信息学技术在蛋白质数据库进行搜索,对选取的蛋白质进行鉴定,进而确定胃癌相关蛋白的候选蛋白。5.用Western Blot技术对鉴定出的蛋白S100A9在胃癌组织及癌旁组织的表达情况分析。结果1.对胃癌组和癌旁组总蛋白样品分别进行3次2-DE,平均检测到的蛋白点数分别为胃癌组737±33个,癌旁组713±29个,匹配率分别为81.1%和87.0%;同一胃癌组织的3块不同凝胶之间蛋白质点在等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是(1.23±0.27)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方向上的偏差为(1.49±0.35)mm。2.胃癌组织和癌旁组织双向电泳图谱经ImageMaster 2D platinum6.0软件进行分析,共筛选出42个表达不同的蛋白点。3.对制备凝胶中差异蛋白点进行质谱鉴定和蛋白质数据库搜索,鉴定出的10种蛋白分别是:S100钙结合蛋白A8、原肌球蛋白1、胶转蛋白、F-actin加帽蛋白α1亚基、S100钙结合蛋白A9、热休克蛋白27、反应调节因子、Profilin、热休克蛋白60和细胞骨架蛋白10。4.Western Blot结果显示S100A9在人胃癌组织中高表达,而在癌旁组织低(无)表达,与蛋白质组学的实验结果结果相同。结论1.建立人胃癌组织与癌旁组织的双向凝胶电泳图谱,并鉴定出10种胃癌相关蛋白的候选蛋白,为下一步研究作基础。2.S100A9在人胃癌组织中高表达,而在癌旁组织低(无)表达,提示:S100A9可能为胃癌的分子标志。